Использование замороженных оттаять эмбрионов для высокоэффективного производства генетически модифицированных мышей

Наш протокол облегчает подготовку генетически модифицированных мышей легко, эффективно и быстро из одноклеточных эмбрионов мыши. Наш протокол сочетает в себе использование лиофилоотных одноклеточных эмбрионов и электропорации, что позволяет быстрому поколению генетически модифицированных мышей, включая мышей-мутантов, с высокой эффективностью и низкой скоростью мозаики. Для экстракорпорального оплодотворения, начните с супер овуляции четырех или восьминедельной самки мышей C57BL/6J через внутриперитонеалевую инъекцию 7,5 международных единиц гонадотропина сыворотки беременной кобылы, а затем интраперитонеальной инъекции 7,5 международных единиц человеческого хорионического гонадотропина 48 часов спустя.

Далее, удалить cauda epididymis от сексуально зрелых трех до пятимесячного мужчины C57BL/6J мышей и использовать вскрытия иглы для извлечения тромбов сперматозоидов. Затем инкубировать сгустки в 200 микролитер падение HTF при 37 градусов по Цельсию и 5%углекислого газа в течение 1,5 часов для емкости. Через 16-18 часов после инъекции хорионического гонадотропина человека соберите комплексы ооцитов кумуляции из яйцеклетки и инкубировать комплексы 200 микролитров HTF, покрытых жидким парафином для не более чем двухчасовой инкубации в инкубаторе клеточной культуры.