Эффективная мышиная модель односторонней почечной ишемии-реперфузионной травмы

Почечная ишемия-реперфузионное повреждение является основной причиной острой почечной недостаточности. Эта модель очень полезна для понимания патофизиологических изменений, которые происходят в почках после ишемического инсульта. Эта модель эффективна с точки зрения времени и затрат и обеспечивает высокую воспроизводимость данных.

В дополнение к этому, эта односторонняя модель почечной ишемии позволяет исследователю работать с более длительным ишемическим временем, сохраняя при этом высокую выживаемость. Для начала поместите обезболенную мышь на операционный стол. После стерилизации хирургической области используйте лезвие скальпеля, чтобы сделать примерно односантиметровый дорсальный боковой хирургический разрез на правом фланге за ребром и продолжить лечения примерно на один сантиметр параллельно поясничной средней линии.

Трансекция мускулатуры живота с помощью ножниц для визуализации забрюшинного пространства. Используйте стерильный ватный тампон, чтобы удалить небольшое количество крови, образующейся во время разрезания мышц. Далее выталкиваем правую почку из брюшной полости.

Медленно и осторожно обнажите почку серыми щипцами и определите почечную ножку. Затем аккуратно удалите жировую ткань вокруг ножки. Используйте гемостат Halsted Mosquito для манипулирования сосудистым зажимом.

Для индуцирования ишемии поместите сосудистый зажим над почечной артерией и веной, присутствующими в почечной ножке, избегая пережимания соседнего мочеточника. Накройте зажатую почку стерильной марлей, смоченной в физиологическом растворе, чтобы избежать высыхания. Оставьте почки на марле на 30 минут и периодически контролируйте глубину анестезии и влажность марли.

Незадолго до окончания периода ишемии вскрывайте почку и держите гемостат halsted Mosquito Hemostat, готовый к удалению зажима. В конце периода ишемии откройте сосудистый зажим гемостатом и снимите зажим, чтобы обеспечить перфузию почки. Для фиктивных контрольных животных выполните продемонстрированную операцию без зажима почечной ножки.

После проверки изменения цвета почек верните почку в брюшную полость. Закройте мышцы живота крестообразным рисунком рассасывающимся швом 5-0. Закройте кожу горизонтальным матрасом рассасывающимся швом 5-0.

Очистите рану раствором повидона-йода. После травмы перфузии ишемии снижение массы тела наблюдалось у некоторых мышей с менее чем 10% от первоначальной массы тела. Тем не менее, большинство мышей восстановили свою первоначальную массу тела между 4 и 7 днями после операции.

Контрольные мыши не показали никаких изменений массы тела после операции. Несколько изменений в почечной морфологии после операции были идентифицированы с использованием гематоксилин-эозина, периодической кислоты-Шиффа и трихромового окрашивания Массона. Наличие белкового слепока в трубчатом просвете наблюдалось через четыре часа.

Канальцевая дилатация была обнаружена через восемь часов, а трубчатый слепок, а также клеточный некроз в медуллярных сегментах были замечены через 16 часов после операции IRI. Через 24 часа после операции наблюдалась трубчатая дилатация. Инфильтрация лимфоцитов и макрофагов и увеличенных клеточных ядер были обнаружены через 48 часов.

К 4-му дню наблюдались митотические трубчатые клетки, а на 7-й день после операции ИРИ был выявлен очаговый фиброз. Почечную кору мышей во время ранней реперфузии контролировали с помощью окрашивания PAS и было видно прогрессирующее затухание границы кисти. Области интерстициального фиброза на 7-й день после операции были визуализированы с использованием окрашивания Masson Trichome.

Была разработана трубчатая система оценки травм для классификации повреждений с течением времени. Самые высокие баллы трубчатой травмы были получены между 8 часами и 24 часами после почечной ИРИ. Одними из наиболее важных шагов являются правильное размещение сосудистого зажима в почечной ножке и поддержание постоянной температуры тела во время операции.