Экономичный и эффективный протокол для выделения и культивирования дендритных клеток, полученных из костного мозга, у мышей

Экономичный и эффективный протокол выделения и генерации дендритных клеток, полученных из костного мозга, у мыши. Процедуры, связанные с животными, были одобрены Комитетом по этике животных Института Нанкинского медицинского университета. С увеличением исследования опухолевого иммунитета спрос на клетки ПОСТОЯННОГО тока постепенно увеличивается.

Тем не менее, DC редко встречаются во всех тканях. Традиционный метод в основном индуцирования дифференцировки костного мозга в РС является сложным и дорогостоящим. Два. Выделение костного мозга и получение БМ-клеток Мы жертвуем мышами и фиксируем на мышином операционном столе.

Разрезают кожу левой обнаженной мышцы и бедренной артерии. Не перерезайте бедренную артерию напрямую. В противном случае это вызовет сильное кровотечение и загрязнит поле зрения.

Обрежьте все мышцы вокруг бедренной кости. Медленно растягивайте нижние конечности мыши наружу до выпадения головки бедренной кости и может наблюдаться. Отделите нижние конечности от тела.

Отрежьте заднюю ногу, чтобы получить свободную и полную бедренную кость. Удалите мышцы с помощью марли. Не разрывайте мышцы напрямую.

Бедренная кость мышей хрупкая. Поместите бедренную кость в 75% спирт на две-пять минут. Три. Инъекционную культуру BMDC промыть остаточным спиртом PBS.

Зажмите среднюю и нижнюю часть бедренной кости кровоостанавливающими щипцами, а нижний конец бедренной кости другим гемостатическими щипцами. Кровоостанавливающие щипцы наносятся буквально на бедренную кость, а бедренная кость отрывается от эпифизарной линии. Используйте один мл шприца для прокалывания полости костного мозга от эпифизарной линии.

Используйте полную среду двумя частями промывки полости костного мозга до тех пор, пока кость не станет белой. Собирайте промывочные жидкости. Дополняют полную среду, содержащую ГМ CSF/IL-4 до 24 мл, и высевают в 6-луночную пластину с 4 мл на лунку. Четыре.Результаты.

Через два дня замените все среды, содержащие GM-CSF/IL-4. Половина заменила полную среду, содержащую GM-CSF/IL-4, на четвертый, шестой и восьмой день. Количество клеток достигло пика на седьмой день, а затем постепенно уменьшалось.

Клетки DC образовали большое количество синапсов, демонстрирующих типичную зрелую морфологию клеток DC. Субметрические анализы потока показывают, что соотношение CD11c наложило то, что 71% на шестой день, широкое соотношение увеличилось до 96,1% на 10-й день. Экспрессия CD11c, CD80 и MSC2 постепенно увеличивалась с увеличением времени культивирования. Пять.Заключение.

Короче говоря, мы создали экономичный и эффективный протокол для выделения и генерации дендритных клеток, полученных из костного мозга, у мышей, который занимает всего 10 минут для разделения клеток костного мозга. Большое количество ДК высокой чистоты было собрано после шести-семи дней культивирования с 10 нг на мл, GM-CSF и IL-4.