Разработка и оценка крысиной модели полноразмерных дефектов хряща

Этот протокол не только имитирует возникновение и развитие клинического ФКД, но и обеспечивает надежную модель на животных для оценки терапевтических методов лечения ФТКД. Но эта методика проста в исполнении и позволяет наблюдать за ростом сразу после травмы. Эта методика позволяет успешно имитировать клинические дефекты хряща, предоставляя платформу для изучения патологического процесса дефектов хряща и разработки соответствующих терапевтических препаратов.

Этот метод может быть применен для изучения травматических дефектов хряща, а именно посттравматического остеоартроза. При первом использовании этой техники важно согнуть большеберцовую и малоберцовую кости под углом 90 градусов, чтобы полностью обнажить улитку мыщелка бедренной кости и держать сверло перпендикулярно поверхности хряща. Начните с того, что положите крысу под наркозом на операционный стол в положении лежа на спине.

Наденьте на крысу стерильную простыню, обнажив выбритый и продезинфицированный коленный сустав. Лезвием скальпеля под номером 11 сделайте сантиметровый вертикальный надрез посередине коленного сустава. И разрезаем суставную капсулу и сухожилие четырехглавой мышцы бедра по медиальному краю надколенника.

Затем поверните коленную чашечку наружу и согните большеберцовую и малоберцовую кости под углом 90 градусов, чтобы обнажить мыщелок бедренной кости улиткой. С помощью круглого сверла диаметром 1,6 мм сделайте дефект хряща глубиной 0,1 миллиметра в улитке мыщелка бедренной кости. Протрите место операции ватными шариками, смоченными в 0,9% физиологическом растворе, и замените коленную чашечку.

Затем, удерживая колено в вытянутом положении, сшивайте разрез слой за слоем, используя нерассасывающиеся нити 4-0. Чтобы измерить механический порог вывода крыс, поместите животное в одну пластиковую камеру на платформу из проволочной сетки. Разместите основание из проволочной сетки на высоте 50 сантиметров над столом.

Начинайте измерение MWT через 30 минут адаптации. Затем надавите на нить фон Фрея перпендикулярно поверхности задней лапы крысы. Затем согните кисть на две секунды, избегая самой толстой части центральной части лапы.

Постепенно увеличивайте вес стимула с 4 граммов, пока не возникнет положительная реакция, такая как отдергивание лапы или облизывание. Через 3 дня после моделирования крысы в модельной группе показали снижение MWT по сравнению с фиктивной группой. Предполагают гипералгезию в модельной группе.

MWT модельной группы оставался низким даже через 17 дней. Показательна продолжительность болевой чувствительности. Гистопатологическое окрашивание фиктивной группы показало четкую суставную и интактную поверхность хряща, равномерное распределение хондроцитов и высокую экспрессию коллагена II типа.

Напротив, в модельной группе наблюдалось угнетение поверхности хряща, потеря хондроцитов, увеличение экспрессии матриксной металлопротеиназы MMP13 и снижение экспрессии коллагена II типа. Самое главное, что нужно помнить, это то, что коленная чашечка должна быть уменьшена перед наложением швов.