Стандартизация переноса между лабораториями проточных цитометров для обнаружения лимфоцитов у детей, вакцинированных против японского энцефалита

Метод стандартизации проточного цитометра обеспечивает осуществимый подход к взаимной аккредитации результатов лабораторных исследований и обеспечивает согласованность результатов с исследовательскими проектами в нескольких центрах. Метод, минимизирующий затраты времени, прост в исполнении, оснащен автоматизацией, анализирует шаблон и может значительно снизить требования к анализу данных. Начните создание новой конфигурации в программном обеспечении цитометра А из передающей лаборатории, нажав кнопку цитометра и выбрав просмотр конфигураций.

Щелкните правой кнопкой мыши папку базовых конфигураций в списке конфигураций, выберите новую папку и переименуйте ее. Затем создайте новую конфигурацию, щелкнув правой кнопкой мыши базовую конфигурацию и скопировав ее. Щелкните правой кнопкой мыши новую папку и вставьте базовую конфигурацию перед переименованием новой конфигурации, Стандартизированный метод передача"Перетащите имя параметра, например, FETC из списка параметров, на соответствующий детектор 530/30, а также отредактируйте дополнительные параметры в новой конфигурации.

Чтобы стандартизировать эксперимент в переносимой лаборатории, запустите проверку производительности с помощью этой установки цитометра А и отслеживайте шарики, чтобы убедиться, что цитометр А работает хорошо. Щелкните правой кнопкой мыши параметры цитометра А в окне браузера программного обеспечения и создайте рабочий лист, выбрав параметры приложения. Затем используйте неокрашенный образец для регулировки фотоумножителя, или напряжения ФЭУ, области прямого рассеяния, или FSC, и области бокового рассеяния, или SSC, и всех параметров флуоресценции.

Сохраните параметры приложения, щелкнув правой кнопкой мыши параметры цитометра эксперимента и выбрав параметры приложения. Чтобы автоматически добавить элементы управления компенсацией, нажмите кнопку эксперимента и выберите меню настройки компенсации, прежде чем выбрать создание элементов управления компенсацией. Записывайте данные для всех контрольных шариков компенсации.

После этого нажмите на эксперимент и выберите настройку компенсации, автоматически рассчитайте компенсацию, прежде чем записывать данные для контрольной группы, окрашенной одной клеткой. используйте CD45 RAA APC для изменения значения компенсации R7-18 до 15% APC, используйте CD19 BB700 для изменения значения компенсации APC H7 до 14% BB700 и используйте CD8 R7-18 для изменения значения компенсации APC H7 до 60% R7-18. После записи данных для шариков CST создайте глобальный рабочий лист шаблона целевого значения для ярких шариков CST, после этого запустите образцы на массиве проточных цитометров и соберите 25 000 лимфоцитов.

Создайте глобальный рабочий лист шаблона анализа для образцов и сохраните экспериментальный шаблон на цитометре A.Экспортируйте экспериментальный шаблон с помощью компакт-диска. Чтобы перенести экспериментальный шаблон на цитометр B в тестовой лаборатории, проведите проверку производительности с помощью шариков CST, чтобы убедиться, что цитометр B работает хорошо. Импортируйте экспериментальный шаблон из цитометра A и создайте эксперимент для цитометра B, используя шаблон.

Используя одну и ту же партию шариков CST, отрегулируйте напряжения флуоресцентных параметров для каждого флуоресцентного канала в соответствии с предыдущим прибором MFI. При необходимости отрегулируйте напряжение FSC с помощью неокрашенного образца. Щелкните правой кнопкой мыши настройки экспериментального цитометра и выберите настройки приложения, чтобы сохранить настройки приложения.

Затем измените значение компенсации R7-18 на 15% APC с помощью CD45 RA APC. Используйте CD19 BB700 для изменения значения компенсации APC H7 до 24% BB700. И используйте CD8 R7-18 для изменения значения компенсации APC H7 до 60% R7-18.

После изменения значения компенсации проведите прогон на проточном цитометре B и соберите 25 000 лимфоцитов. На глобальном листе шаблона целевого значения для настройки и отслеживания цитометра или ярких шариков CST были получены графики гистограммы 10 каналов флуоресценции, целевое значение для каждого параметра отображалось путем отображения медианы в воротах гистограммы. точечные графики образца, полученные с помощью цитометра А и В после стандартизации прибора, продемонстрировали согласованность данных между различными приборами с использованием шаблона автоматического анализа.

Существенной разницы не наблюдалось при сравнении результатов шести образцов по двум разным моделям приборов. Результаты 15 лимфоидных подмножеств, полученных с различных инструментов с использованием стандартизированного метода, получили весьма сопоставимые данные. Одно и то же имя конфигурации, создание шаблона и создание экотехнологических значений бусин безопасности в разных инструментах являются важными шагами в этом протоколе.