Артериальный тромбоз, индуцированный хлоридом железа, и сбор образцов для анализа 3D-электронной микроскопии

С помощью этого метода можно определить, какие компоненты тромбоцитов и системы гемостаза важны для тромбоза. Кроме того, этот метод может определить, как на рост и архитектуру тромба влияют на клеточный уровень. Основное преимущество этой методики заключается в том, что она позволяет воспроизводимым способом изучать многие стадии тромбоза на структурном уровне.

Человек, плохо знакомый с этой техникой, должен избегать чрезмерного обращения с тканью в области операции. Это может привести к кровотечению и может чрезмерно усложнить идентификацию сонной артерии. Начните отмечать место травмы после обнажения сонной артерии, свободно опоясывая область между двумя хирургическими нитями, имеющими размер 0,1 миллиметра.

Поместите зонд под артерию дистальнее нижней нити. Вставьте пластиковую деталь под артерию между двумя нитями, чтобы отметить место повреждения хлоридом железа. Перед выполнением травмы проведите измерения потока, чтобы отметить базальный поток.

Выполните травму, поместив пропитанную хлоридом железа фильтровальную бумагу на артерию на три минуты. Снимите фильтровальную бумагу через три минуты, чтобы предотвратить различную степень повреждения и облегчить подсчет расхода с помощью зонда. Добавьте физиологический раствор в место повреждения, чтобы удалить избыток остаточного хлорида железа.

Следите за показаниями расхода. Когда расход упадет ниже 50% от начального значения, снимите зонд. Быстро высушите область и добавьте фиксатор, чтобы зафиксировать область травмы снаружи.

Далее оперативно удерживают щипцами артерию возле места повреждения. Обрежьте нижнюю резьбу и верхнюю резьбу. Положите ткань на пластиковую чашку для культивирования тканей в той же ориентации, в которой она была собрана, и добавьте несколько капель фиксатора.

С помощью скальпеля очистите лишнюю ткань вокруг артерии. Обеспечьте регистрацию ориентации кровотока, разрезав один конец горизонтально, а другой сужающийся или косой. Поместите образец в фиксатор на один час при комнатной температуре, затем храните образец в 1% параформальдегиде при температуре 4 градуса Цельсия до тех пор, пока он не отправится во влажный лед для анализа электронной микроскопии.

Данные были построены в виде кривой выживаемости Каплана-Мейера, точечной диаграммы с полосами, показывающими конечный кровоток во время прекращения кровотока или прекращения эксперимента, или в виде линейного графика. Кровоток увеличивался внезапно в некоторых случаях после постепенного уменьшения в течение нескольких минут, что указывало на частичное выделение растущего тромба, и считалось событием эмболизации. Морфология окклюзионного тромба также изучалась с помощью этого метода.

Быстрый сбор образца во время процесса тромбоза является наиболее важным шагом, поскольку задержка в этом процессе может привести к неправильной интерпретации нашего структурного анализа.