November 3rd, 2023
В этом протоколе описан метод синхронного сбора и совместной регистрации внутриклеточных сигнальных событий и секреции инсулина и глюкагона первичными псевдоостровками человека с использованием аденовирусной доставки циклического биосенсора аденозинмонофосфата (цАМФ), детектора разности цАМФ in situ (cADDis) и микроперифузионной системы.
Наша лаборатория работает над изучением, предотвращением и обращением вспять дисфункции бета-клеток и других аномалий век при диабете первого и второго типа. Наши исследования сосредоточены на патогенезе диабета человека, объединяя исследования биологии поджелудочной железы и век человека, а также здоровья и болезней. Человеческие глазки представляют собой сферические трехмерные структуры, и доступ к клеткам по всей длине глаза представляет собой некоторые экспериментальные проблемы.
Например, при попытке внедрить биосенсоры для понимания передачи сигналов клетками глазков, наш протокол псевдовек преодолевает эту проблему, выполняя генетические манипуляции в состоянии одной клетки и агрегируя эти трансдуцированные клетки глаз человека в псевдовеки для последующих исследований. Наша псевдосистема век позволяет нам экспрессировать биосенсоры по всему глазу, а не только по поверхности века. В сочетании с нашей системой визуализации живых клеток и системой микроперфузии мы можем измерять и регистрировать динамические внутриклеточные процессы с последующей секрецией гормонов.
Этот протокол может быть применен для ответа на целый ряд важных научных вопросов. Например, стратегии подавления экспрессии генов могут быть объединены с этим подходом, чтобы понять влияние интересующего гена на функцию век и связанные с ней сигнальные пути, как глобально, так и индивидуально.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Это исследование посвящено дисфункции бета-клеток и аномалиям островков поджелудочной железы при диабете, используя модельную систему псевдоостровков для синхронного получения клеточных сигналов и секреции гормонов. Метод включает аденовирусную доставку биосенсора цАМФ и систему микроперфузии для обеспечения динамического анализа реакций инсулина и глюкагона.