Псевдоостровковая система человека для синхронной оценки динамики флуоресцентных биосенсоров и секреторных профилей гормонов
November 3rd, 2023
В этом протоколе описан метод синхронного сбора и совместной регистрации внутриклеточных сигнальных событий и секреции инсулина и глюкагона первичными псевдоостровками человека с использованием аденовирусной доставки циклического биосенсора аденозинмонофосфата (цАМФ), детектора разности цАМФ in situ (cADDis) и микроперифузионной системы.
Наша лаборатория работает над изучением, предотвращением и обращением вспять дисфункции бета-клеток и других аномалий век при диабете первого и второго типа. Наши исследования сосредоточены на патогенезе диабета человека, объединяя исследования биологии поджелудочной железы и век человека, а также здоровья и болезней. Человеческие глазки представляют собой сферические трехмерные структуры, и доступ к клеткам по всей длине глаза представляет собой некоторые экспериментальные проблемы.
Например, при попытке внедрить биосенсоры для понимания передачи сигналов клетками глазков, наш протокол псевдовек преодолевает эту проблему, выполняя генетические манипуляции в состоянии одной клетки и агрегируя эти трансдуцированные клетки глаз человека в псевдовеки для последующих исследований. Наша псевдосистема век позволяет нам экспрессировать биосенсоры по всему глазу, а не только по поверхности века. В сочетании с нашей системой визуализации живых клеток и системой микроперфузии мы можем измерять и регистрировать динамические внутриклеточные процессы с последующей секрецией гормонов.
Этот протокол может быть применен для ответа на целый ряд важных научных вопросов. Например, стратегии подавления экспрессии генов могут быть объединены с этим подходом, чтобы понять влияние интересующего гена на функцию век и связанные с ней сигнальные пути, как глобально, так и индивидуально.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Обзор
Это исследование посвящено дисфункции бета-клеток и аномалиям островков поджелудочной железы при диабете, используя модельную систему псевдоостровков для синхронного получения клеточных сигналов и секреции гормонов. Метод включает аденовирусную доставку биосенсора цАМФ и систему микроперфузии для обеспечения динамического анализа реакций инсулина и глюкагона.
Ключевые компоненты исследования
Область исследования
- Диабет 1-го и 2-го типа
- Биология человеческих островков
- Динамика клеточной сигнализации
Описание
- Человеческие острова представляют собой сферические структуры, создающие экспериментальные трудности.
- Протокол псевдоостровков решает эти проблемы для эффективного введения биосенсоров.
- Понимание сигнализации островков важно для исследований диабета.
Использованные методы
- Аденовирусная доставка для экспрессии биосенсоров
- Первичная человеческая модель псевдоостровков
- Система микроперфузии для измерения секреции гормонов
Основные результаты
- Успешная совместная регистрация внутриклеточной сигнализации и высвобождения гормонов.
- Обеспечено анализ влияния подавления генов на функцию островков.
- Динамический мониторинг секреторных реакций в реальном времени.
Выводы
- Это исследование предоставляет надежный протокол для исследования сигнализации гормонов островков.
- Оно имеет значительные последствия для понимания биологии островков при диабете.
Часто задаваемые вопросы
Executive Industry Relevance
The human pseudoislet system enables synchronous, quantitative assessment of intracellular signaling and hormone secretion in primary human islet cells, addressing a critical bottleneck in diabetes target validation. By allowing genetic manipulation and biosensor integration throughout the 3D islet structure, this platform enhances predictive confidence in mechanistic studies and supports risk-adjusted portfolio decisions in metabolic disease research. Its integration of live-cell imaging and microperifusion workflows positions it as a reusable capability for early discovery and translational research pipelines.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables interrogation of therapeutic hypotheses by linking intracellular signaling to hormone secretion in human islet cells.
- Facilitates biological de-risking through gene-silencing or biosensor-based pathway clarification in a physiologically relevant 3D context.
- Supports predictive confidence and functional target validation for diabetes and metabolic disease programs.
Screening & Assay Development
- Prepares validated pseudoislet systems for downstream compound screening and mechanistic assays.
- Standardizes assay conditions for reproducible, quantitative measurement of hormone secretion and biosensor dynamics.
- Enables scalable, multiplexed evaluation of candidate interventions in a human-relevant model.
Translational & Preclinical Research
- Aligns in vitro findings with disease-relevant human islet biology for translational biomarker development.
- Provides continuity from discovery through preclinical validation by enabling mechanistic de-risking in primary human tissue.
- Supports risk-adjusted advancement decisions by integrating functional and signaling readouts.
Pipeline & Workflow Integration
This system bridges early discovery, target validation, and preclinical research by enabling hypothesis-driven interrogation of islet signaling and function in a single workflow.
- Discovery Biology: Supports mechanistic hypothesis testing and pathway clarification via synchronous biosensor and hormone readouts.
- Screening: Delivers assay-ready, reproducible pseudoislet models for quantitative evaluation of interventions.
- Analytics: Provides dynamic, quantitative measurements of cAMP signaling and hormone secretion for robust condition comparison.
- Translational Research: Connects in vitro mechanistic insights to human disease biology, supporting biomarker alignment.
- Enterprise Reuse: Offers a standardized, adaptable platform for repeated use across metabolic disease discovery programs.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in diabetes target validation.
- Operational Value: Enhances standardization, reproducibility, and scalability of islet functional assays.
- Strategic Value: Improves go/no-go decision quality and capital efficiency by integrating functional and signaling data.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization and advancement of metabolic disease assets.
Implementation Considerations
- Requires expertise in human islet isolation, genetic manipulation, and live-cell imaging.
- Demands access to confocal microscopy, microperifusion systems, and quantitative hormone analytics.
- Necessitates cross-team standardization of pseudoislet preparation and assay protocols.
- Adaptation may be needed for different donor sources or disease models.
- Throughput and scalability are limited by primary tissue availability and technical complexity.
