Проектирование и создание настраиваемого однообъективного флуоресцентного микроскопа для визуализации сетей цитоскелета
January 26th, 2024
В этом протоколе подробно описывается, как построить однообъективный флуоресцентный микроскоп со световым листом и как его использовать для визуализации сетей цитоскелета.
Наша работа направлена на углубление знаний о взаимосвязи между динамикой транс-работы, локальной структурой и механическими свойствами в материалах, далеких от равновесия. Визуализация далеких от равновесия материалов, таких как сети цитоскелетов, требует возможности получать изображения плотных, трехмерных образцов с сопоставимым качеством изображения по всему объему образца, нанося при этом минимальный ущерб за счет фотообесцвечивания, технически сложной задачи, для которой лучше всего подходит флуоресцентная световая микроскопия. Флуоресцентные световые микроскопы обеспечивают превосходные возможности оптического секционирования, что позволяет получать изображения этих толстых трехмерных образцов в течение длительного времени с минимальным фотообесцвечиванием.
В частности, система светового листа с одним объективом, которую мы представим, совместима с традиционными скользящими образцами, что делает ее очень универсальным инструментом. Подавляющее большинство однообъективных световодов написано для пользователей с большим опытом работы с оптикой. Чтобы сделать сложную настройку в стиле светового листа с одним объективом более доступной, в этом подробном руководстве описаны шаги, которые может выполнить пользователь с глубокими знаниями курса оптики начального уровня.
Обзор
Это исследование направлено на улучшение понимания динамики работы с транс-материалами вдали от равновесия, с особым акцентом на сети цитоскелета. Исследование описывает конструкцию и применение однообъективного световой пластинки флуоресцентного микроскопа для оптимальной визуализации этих плотных трехмерных образцов.
Основные компоненты исследования
Область исследования
- Клеточная биология
- Микроскопия
- Материалы, далекие от равновесия
Предыстория
- Проблемы визуализации плотных трехмерных биологических образцов
- Важность минимизации фотоотбеливания во время длительных сессий визуализации
- Преимущества световой пластинки микроскопа для оптического секционирования
Использованные методы
- Конструкция однообъективного световой пластинки флуоресцентного микроскопа
- Использование тестовых образцов микротрубочек, меткенных родаминами
- Процедуры выравнивания и калибровки для оптимальной визуализации
Основные результаты
- Успешная визуализация сетей цитоскелета
- Демонстрация минимального повреждения образцов во время визуализации
- Эффективная визуализация на различных глубинах в образце
Выводы
- Протокол представляет осуществимый подход к визуализации сложных биологических структур
- Этот метод может значительно помочь исследователям в изучении механически активных биологических материалов
