Анализ активности факторов внеклеточной везикулярной ткани
29 декабря 2023 г.
Здесь мы опишем собственный анализ активности фактора внеклеточной везикулярной ткани. Анализы, основанные на активности, и анализы на основе антигенов были использованы для измерения тканевого фактора во внеклеточных везикулах из образцов плазмы крови человека. Анализы, основанные на активности, имеют более высокую чувствительность и специфичность, чем анализы на основе антигенов.
Низкий уровень тканевых фактор-позитивных внеклеточных везикул присутствует в плазме крови пациентов с различными заболеваниями. Однако большинство анализов на основе антигенов, включая ИФА и проточную цитометрию, не обладают достаточной чувствительностью для обнаружения этих низких уровней. Во многих работах для обнаружения тканевого фактора в плазме использовался ИФА или проточная цитометрия.
Наш протокол измеряет активность тканевого фактора в плазме с высокой чувствительностью и специфичностью, хотя существует некоторая вариабельность из-за использования функционального анализа. Существуют коммерческие наборы для анализа, которые измеряют уровень активности тканевого фактора в плазме. Однако эти наборы не содержат антител к тканевым факторам, и поэтому не могут различать тканевозависимую и тканефакторно-независимую генерацию фактора X.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Обзор
В данной статье представлен разработанный внутрилабораторный метод измерения активности тканевого фактора в экстрацеллюлярных везикулах плазмы крови человека. Данный анализ демонстрирует более высокую чувствительность и специфичность по сравнению с традиционными методами, основанными на определении антигенов.
Основные компоненты исследования
Область науки
- Нейронаука
- Биология
Теоретические основы
- Низкие уровни внеклеточных везикул, положительных по тканевому фактору, обнаруживаются в плазме при различных заболеваниях.
- Антигенные методы анализа, такие как ELISA и проточная цитометрия, часто не обладают чувствительностью, необходимой для такого обнаружения.
- Существующие коммерческие наборы не позволяют дифференцировать генерацию фактора X, зависящую от тканевого фактора, от независимой от него.
Цель исследования
- Для измерения активности тканевого фактора в плазме с повышенной чувствительностью и специфичностью.
- Для предоставления функционального анализа, позволяющего обнаруживать низкие уровни тканевого фактора.
- Для устранения ограничений современных методов обнаружения на основе антигенов.
Используемые методы
- Собственный метод анализа активности тканевого фактора внеклеточных везикул.
- Сравнение анализов, основанных на активности и на определении антигена.
- Оценка чувствительности и специфичности при выявлении тканевого фактора.
- Анализ вариабельности результатов функционального анализа.
Основные результаты
- Анализы на основе активности продемонстрировали более высокую чувствительность по сравнению с анализами на основе антигенов.
- Функциональный анализ успешно выявил низкие уровни тканевого фактора в плазме.
- В результатах была отмечена вариабельность, обусловленная природой функционального анализа.
- Коммерческие наборы были признаны недостаточно эффективными для дифференциации активности тканевого фактора.
Выводы
- Разработанный в нашей лаборатории анализ предоставляет надежный метод измерения активности тканевого фактора.
- Он обеспечивает значительное улучшение по сравнению с традиционными анализами, основанными на определении антигена.
- Данный метод может углубить понимание роли тканевого фактора при различных заболеваниях.
Часто задаваемые вопросы
Значимость для отрасли
Точное количественное определение активности тканевого фактора во внеклеточных везикулах имеет решающее значение для снижения риска тромбоэмболических осложнений и понимания коагулопатий, связанных с заболеванием, на ранних этапах разработки лекарственных препаратов. Описанный анализ, основанный на определении активности, позволяет осуществлять чувствительное и специфичное детектирование TF-положительных EV, что способствует механистической валидации мишеней и приоритизации портфеля препаратов при показаниях, в которых задействованы пути коагуляции. Данная возможность повышает прогностическую достоверность на стыке биологических исследований и трансляционной медицины.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Ранние этапы поиска и валидация мишени
- Позволяет проводить функциональный анализ активности тканевого фактора в образцах плазмы, имеющих значение для исследования заболеваний.
- Способствует снижению биологических рисков путем дифференциации TF-зависимой и TF-независимой генерации FXa.
- Повышает точность прогнозирования при валидации мишеней в путях коагуляции и воспаления.
Скрининг и разработка анализа
- Обеспечивает валидированное количественное определение активности тканевого фактора, ассоциированного с внеклеточными везикулами.
- Способствует стандартизации и воспроизводимости анализа за счет использования хромогенного субстрата и стандартной кривой.
- Позволяет надежно оценивать влияние соединений на активность TF в ходе скрининговых кампаний.
Трансляционные и доклинические исследования
- Соответствует стратегиям трансляционных биомаркеров путем количественного определения TF-положительных внеклеточных везикул, связанных с тяжестью заболевания.
- Обеспечивает преемственность от этапа поиска до доклинической валидации на моделях тромбоза и коагулопатии.
- Снижает риски при принятии решений о дальнейшем продвижении за счет предоставления механистических доказательств модуляции активности TF.
Интеграция конвейеров и рабочих процессов
Данный анализ активности интегрируется в непрерывный цикл от поиска мишени до доклинических исследований, обеспечивая проверку гипотез, валидацию мишени и согласование трансляционных биомаркеров для программ, связанных со свертыванием крови.
- Биология открытий: поддерживает проверку механистических гипотез и позволяет прояснить роль сигнального пути TF в моделях заболеваний.
- Скрининг: обеспечивает количественные, воспроизводимые результаты для скрининга соединений и разработки методов анализа.
- Аналитика: обеспечивает чувствительное измерение генерации FXa и статистическое разграничение TF-зависимой активности.
- Трансляционные исследования: связывает результаты открытий со стратегиями использования доклинических биомаркеров при оценке тромботического риска.
- Корпоративное повторное использование: предлагает универсальную платформу для измерения функциональной активности EVTF в рамках нескольких программ.
Операционное и корпоративное влияние
- Научная ценность: Повышает достоверность прогнозов и устраняет неопределенность в механизмах валидации мишеней, связанных с TF.
- Операционная ценность: Улучшает стандартизацию, воспроизводимость и масштабируемость анализа для использования в различных программах.
- Стратегическая ценность: Служит основой для принятия решений о продолжении или прекращении разработки (go/no-go) и снижает биологические риски на поздних стадиях в портфелях, ориентированных на коагуляцию.
- Влияние на портфель: Позволяет осуществлять приоритизацию с учетом рисков и продвигать активы, в которых задействован путь TF.
Особенности реализации
- Требуется опыт в области биологии коагуляции и разработки функциональных анализов.
- Необходим доступ к планшетным ридерам, оборудованию для центрифугирования и валидированным реагентам.
- Требуется стандартизация между исследовательскими группами для обеспечения воспроизводимости и сопоставимости данных.
- Может потребоваться адаптация для различных источников плазмы или моделей заболеваний.
- Вариабельность функционального анализа должна контролироваться с помощью строгого контроля и стандартных кривых.
