Установление и характеристика органоидов желудка, полученных от пациентов, из биопсии доброкачественного тела желудка и антрального эпителия
January 26th, 2024
Органоиды, полученные от желудочных пациентов, находят все большее применение в исследованиях, однако формальные протоколы получения органоидов желудка человека из одноклеточных пищеварителей со стандартизированной плотностью посева отсутствуют. В данном протоколе представлен подробный метод надежного создания органоидов желудка из биопсийной ткани, полученной при эндоскопии верхних отделов желудка.
Наши исследования сосредоточены на наследственных причинах рака желудка. В частности, нас интересует наследственный диффузный рак желудка, вызванный болезнетворными вариантами в гене CDH1 или CTNNA1. Мы также исследуем роль BRCA1 и BRCA2 в риске развития рака желудка и канцерогенезе.
Органоиды все чаще используются в различных областях исследований, и гастроэнтерология не является исключением, поэтому возникает необходимость стандартизации этих методов для получения этих органоидов, в частности, желудочных органоидов, полученных от пациентов. Наш протокол предлагает пошаговый метод надежной генерации желудочных органоидов пациента из биопсии как антральной области, так и области тела желудка. В частности, мы используем подход дигестрирования одной клетки, чтобы обеспечить стандартизированный посев клеток, чтобы сделать надежное сравнение между органоидами, полученными от разных пациентов.
Наши результаты показывают, что по сравнению с желудочными органоидами, полученными от пациента из области тела желудка, органоиды из антральной области на самом деле увеличиваются в количестве и увеличиваются в размерах в течение 20 дней после первоначального посева. Эти результаты должны быть приняты во внимание исследователями, стремящимися использовать желудочные органоиды, полученные из различных областей желудка.
Обзор
Это исследование изучает наследственные причины рака желудка, сосредоточиваясь на вариантах генов CDH1 и CTNNA1. В исследовании представлен надежный протокол для создания гастричных органоидов, полученных от пациентов, из биопсий, взятых во время верхней гастродуоденоскопии, демонстрирующий различия в скорости роста органоидов, полученных из антрального и телечного отделов желудка.
Ключевые компоненты исследования
Область исследования
- Наследственные причины рака желудка
- Создание гастричных органоидов
- Стандартизация биологических методов
Фон
- Наследственный диффузный рак желудка и генетические варианты
- Использование органоидов в исследованиях гастроэнтерологии
- Стандартизированные протоколы для развития гастричных органоидов
Используемые методы
- Изоляция одиночных клеток из биопсий гастричной ткани
- Гастричные органоиды, полученные от пациентов, как биологическая модель
- Протоколы клеточной дигестии и высева в культуре
Основные результаты
- Органоид из антрального биопсийного материала имеет больший размер и скорость роста по сравнению с органоидами из телечного материала
- Значительные различия в морфологии органоидов у разных пациентов
- Стандартизированные методы позволяют надежное сравнение скорости роста органоидов
Выводы
- Исследование устанавливает надежный метод создания гастричных органоидов, что способствует будущим исследованиям рака желудка.
- Результаты подчеркивают важность исходного материала ткани для роста органоидов, что важно для воспроизводимости эксперимента.
Часто задаваемые вопросы
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:20
Isolating Single Cells from Upper Endoscopy Biopsies Derived from Gastric Patients for Organoid Generation
3:36
Embedding Gastric Biopsy‐Derived Single Cells in a Basement Membrane Matrix Dome for Organoid Generation
5:37
Routine Passaging of Patient‐Derived Gastric Organoids Through Fragmentation
