Визуализация кальция в режиме реального времени инфицированных вирусом монослоев органоидов кишечника человека с использованием генетически кодируемых кальциевых индикаторов

Этот протокол описывает подход к выполнению визуализации кальция в инфицированных вирусом органоидах кишечника человека и предлагает подход к анализу.

В нашей работе мы стремимся понять, как вирусы нарушают передачу сигналов в кишечном эпителии. Мы особенно заинтересованы в понимании того, каким образом инфицированные вирусом клетки нарушают регуляцию соседних неинфицированных клеток, способствуя патогенезу. Недавно мы обнаружили, что клетки, инфицированные ротавирусом, высвобождают импульсы АДФ, который нарушает регуляцию соседних неинфицированных клеток, способствует распространению вируса и усугубляет заболевание.

Несмотря на то, что визуализация кальция очень популярна в таких областях, как неврология, она не получила широкого распространения для изучения биологии эпителия или вирусологии. Этот протокол предлагает подход к адаптации существующих технологий и модельных систем для изучения кальциевой сигнализации и живой инфицированной вирусом эпителиальной ткани. Разрабатывая органоиды для экспрессии генетически кодируемых индикаторов кальция, наш подход позволяет получить последовательную, воспроизводимую долгосрочную визуализацию в модельной системе, которая повторяет клеточное разнообразие кишечного эпителия человека.

Мы стремимся понять эффекты вирус-индуцированной паракринной пуринергической сигнализации как для хозяина, так и для вируса. Наша будущая работа также определит, является ли этот тип сигнализации широко консервативным для других вирусов и схожи ли эффекты.