Мультиплексная циклическая флуоресцентная иммуногистохимия
26 января 2024 г.
Мультиплексная циклическая иммуногистохимия позволяет in situ обнаруживать несколько маркеров одновременно с помощью повторной инкубации антиген-антитело, сканирования изображений, выравнивания и интеграции изображений. Здесь мы представляем операционный протокол идентификации субстратов иммунных клеток с помощью этой технологии в образцах рака легких и парных метастазов в головном мозге.
Задача иммуногистохимии состоит в том, чтобы выбрать виды первичных и вторичных моноклональных антител, чтобы избежать перекрестной реактивности и получить лучшую специфичность и повторяемость. Решение о половой принадлежности необходимо для оптимизации коэффициента разведения антител. Между тем, еще одной проблемой является согласование локализации и подструктур.
Использование этого протокола соответствует технической эволюции распределения трех лимфоцитарных субпопуляций, таких как КТ три, положительная КТ 3, КТ 8 положительная и КТ 20 положительная, на основе количества клеток и экспрессии белка в консервативных тканях, также можно наблюдать уровень инфильтрации. В нашем протоколе параметр Антитела и вторичные антитела к фтору получены из разных видов в смеси iso, что делает нас эффективными. Этот показатель также показывает специфическую меру между антителом и антигеном.
Обзор
В данной статье представлен протокол мультиплексного циклического иммуногистохимического анализа, позволяющий одновременно определять несколько маркеров в образцах рака легкого и метастазов в головном мозге. Данный метод позволяет решить проблемы специфичности антител и локализации субпопуляций иммунных клеток.
Основные компоненты исследования
Область науки
- Иммуногистохимия
- Онкология
- Нейробиология
Теоретическая часть
- Иммуногистохимия требует тщательного подбора антител для предотвращения перекрестной реактивности.
- Стандартизация разведения антител имеет решающее значение для получения оптимальных результатов.
- Совмещение клеточных структур необходимо для точного анализа.
- Данный протокол посвящен изучению лимфоцитарных субпопуляций в раковых тканях.
Цель исследования
- Предоставить детальный протокол мультиплексного циклического иммуногистохимического анализа.
- Повысить специфичность детекции иммунных клеток в образцах раковых опухолей.
- Обеспечить возможность изучения лимфоцитарной инфильтрации при раке легкого и метастазах в головной мозг.
Используемые методы
- Повторная инкубация антигена с антителом.
- Сканирование и совмещение изображений.
- Детекция CD3-, CD8- и CD20-положительных лимфоцитов.
- Анализ экспрессии белков в консервированных тканях.
Основные результаты
- Успешная идентификация субстратов иммунных клеток при раке легкого.
- Демонстрация уровней лимфоцитарной инфильтрации.
- Эффективная визуализация нескольких иммунных маркеров.
- Стандартизация повышает воспроизводимость и специфичность.
Выводы
- Данный протокол расширяет понимание иммунных ответов при раке.
- Мультиплексная циклическая иммуногистохимия является ценным инструментом для исследователей.
- Дальнейшие исследования в области онкологии могут основываться на данной методологии.
Часто задаваемые вопросы
Практическая значимость для промышленности
Мультиплексная циклическая флуоресцентная иммуногистохимия позволяет проводить высокосодержательное пространственное профилирование субпопуляций иммунных клеток и белковых мишеней в микроокружении опухоли, что способствует развитию трансляционной онкологии и исследований в области иммунотерапии. Данный подход повышает достоверность прогнозов при валидации мишеней и снижении механистических рисков за счет количественной оценки инфильтрации лимфоцитов и межклеточных взаимодействий в клинически значимых тканях. Воспроизводимость и возможность мультиплексирования делают этот метод критически важным инструментом для приоритизации портфеля препаратов и принятия решений на основе биомаркеров на этапах раннего поиска и в трансляционных исследованиях.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Ранние этапы поиска и валидация мишени
- Позволяет проводить пространственно-разрешенное исследование субпопуляций иммунных клеток и целевых белков в опухолевых тканях.
- Способствует снижению механистических рисков за счет уточнения взаимодействий между иммунными клетками и опухолью, а также паттернов инфильтрации лимфоцитов.
- Повышает прогностическую уверенность при выборе мишеней для программ в области иммуноонкологии.
Скрининг и разработка анализа
- Подготовка валидированных систем тканей FFPE для последующего мультиплексного анализа маркеров.
- Стандартизация выбора и разведения антител для обеспечения воспроизводимости и количественных результатов.
- Обеспечение надежных и масштабируемых рабочих процессов для скрининга иммунных маркеров и сравнительных исследований.
Трансляционные и доклинические исследования
- Обеспечивает согласованность иммунного профилирования с моделями, соответствующими заболеванию, такими как ткани рака легкого и метастазов в головном мозге.
- Поддерживает разработку трансляционных биомаркеров путем количественного определения субпопуляций лимфоцитов in situ.
- Обеспечивает преемственность от этапа поиска до доклинической валидации иммунных мишеней.
Интеграция конвейеров и рабочих процессов
Данный рабочий процесс мультиплексного иммуногистохимического анализа связывает этапы первичного поиска, валидации мишеней и трансляционных исследований, обеспечивая количественное иммунное профилирование с пространственным разрешением в тканях, фиксированных в формалине и залитых парафином (FFPE).
- Биология открытий: Обеспечивает проверку гипотез о распределении иммунных клеток и перепрограммировании микроокружения опухоли.
- Скрининг: Обеспечивает воспроизводимое количественное определение маркеров для подготовки анализа и сравнительного исследования.
- Аналитика: Предоставляет данные о количестве клеток и экспрессии белков для проведения сравнений между различными условиями.
- Трансляционные исследования: Согласует количественную оценку иммунных маркеров с моделями заболеваний для обеспечения преемственности биомаркеров.
- Корпоративное повторное использование: Предлагает стандартизированную мультиплексную платформу, адаптируемую к различным типам тканей и исследовательским задачам.
Операционное и корпоративное воздействие
- Научная ценность: повышает прогностическую достоверность и снижает механистическую неоднозначность при валидации иммунных мишеней.
- Операционная ценность: повышает воспроизводимость, стандартизацию и масштабируемость рабочих процессов иммунного профилирования.
- Стратегическая ценность: улучшает принятие решений о продолжении или прекращении разработки (go/no-go) и эффективность использования капитала за счет внедрения надежной сортировки на основе биомаркеров.
- Влияние на портфель: поддерживает приоритизацию с учетом рисков и продвижение активов в области иммуноонкологии.
Особенности реализации
- Требуется опыт работы в области иммуногистохимии, валидации антител и флуоресцентной визуализации.
- Необходим доступ к валидированным антителам, оборудованию для обработки тканей, фиксированных в формалине и залитых парафином (FFPE), и инфраструктуре для мультиспектральной визуализации.
- Требуется межкомандная стандартизация протоколов выбора антител, их разведения и визуализации.
- Может потребоваться адаптация метода для различных типов тканей или панелей иммунных маркеров.
- Оптимизация соотношения сигнал/шум и предотвращение перекрестной реактивности имеют решающее значение для получения достоверных результатов.
