Isolation of Hypothalamic Microglia from Freshly Perfused Adult Mouse Brain by Magnetic-Activated Cell Sorting

Evangelia Kyriakidou; Giulia Cutugno; Camille Allard; Agnes Nadjar

doi:10.3791/66769

Выделение микроглии гипоталамуса из свежеперфузированного мозга взрослой мыши методом магнитно-ак...

JoVE Journal
Neuroscience

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Neuroscience

Isolation of Hypothalamic Microglia from Freshly Perfused Adult Mouse Brain by Magnetic-Activated Cell Sorting

Выделение микроглии гипоталамуса из свежеперфузированного мозга взрослой мыши методом магнитно-активируемой сортировки клеток

Full Text

1,690 Views

05:53 min

September 6, 2024

DOI: 10.3791/66769-v

Evangelia Kyriakidou*¹, Giulia Cutugno*¹, Camille Allard¹, Agnes Nadjar¹

¹University of Bordeaux, INSERM, Neurocentre Magendie

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study details a protocol for isolating microglial cells from the mouse hypothalamus using magnetically activated cell sorting (MACS). This method ensures a high yield and purity of microglia, enabling researchers to investigate the interaction between microglia and neurons and how nutrition impacts brain function.

Key Study Components

Area of Science

Neuroscience
Cell biology
Microglial research

Background

The hypothalamus plays a crucial role in feeding behavior and energy balance.
Isolating microglia from small brain structures is generally challenging.
Research explores the role of microglia in metabolic conditions influenced by diet.
Understanding the balance between microglial and neuronal interactions is essential.

Purpose of Study

To develop a reliable method for isolating microglial cells for ex vivo analysis.
To study the effects of nutrition on microglial function and metabolism.
To explore the communication between microglia and neurons in relation to metabolic diversity.

Methods Used

Magnetically activated cell sorting (MACS) for isolating microglia.
Focus on the hypothalamus as the biological model.
The protocol allows for viable cells to be plated for in vitro assays.
Protocol designed to achieve high purity and yield in a short time.
Combined approaches involving histological and metabolic observations.

Main Results

The isolation protocol yields cells with high purity and viability.
Microglia are implicated in metabolic diversity and responses to nutrition.
Potential insights into microglia-neuron communication affecting metabolic conditions.
Study highlights the complexity of individual responses to diet.

Conclusions

This protocol facilitates the study of microglial roles in brain metabolism.
It enhances understanding of microglial functions in response to dietary influences.
Findings could provide insights into neuronal health and metabolic disorders.

Frequently Asked Questions

What are the advantages of using MACS for isolating microglia?

MACS allows for high yield and purity of microglia, which is essential for accurate ex vivo analyses and experiments.

How does the protocol ensure viability of isolated cells?

The methodology emphasizes rapid isolation and optimal conditions to maintain the integrity and functionality of cells.

What types of experiments can be performed with the isolated microglia?

Isolated microglia can be used for various in vitro assays to study their metabolic function and interaction with neurons.

Why is the hypothalamus a focus for this research?

The hypothalamus is crucial for regulating feeding behavior and energy balance, making it a key area for understanding metabolic processes.

What implications does this research have for nutritional studies?

It provides insights into how microglial function might vary with diet, potentially informing targeted nutritional interventions for metabolic disorders.

Are there any limitations to this protocol?

While effective, the protocol's efficiency may vary depending on the size of the brain structure and specific experimental conditions.

Мы описываем протокол выделения микроглиальных клеток из гипоталамуса мыши (или эквивалентных небольших структур мозга) с помощью магнитно-активированной сортировки клеток (MACS) за относительно короткое время. Отсортированная по методу MACS микроглия гипоталамуса может быть использована для анализа ex vivo и может быть покрыта для выполнения анализов in vitro .

Наша цель — изучить, как питание влияет на работу мозга, уделяя особое внимание взаимодействию между микроглией и нейронами. И мы уделяем особое внимание гипоталамусу, который является ключевой структурой в контроле пищевого поведения и энергетического баланса. В большинстве исследований используются генные мыши для специфического нацеливания на микроглиальные процессы, а затем комбинируют этот подход с гистологическими или метаболическими наблюдениями, но на всем структурном уровне, но нам все равно придется достичь разрешения на клеточном уровне.

Выделение микроглии из небольших структур мозга является очень сложной задачей, и наш протокол обеспечивает высокий выход и чистоту ценных клеток, что затем позволяет изучить влияние диеты на метаболизм и функцию микроглии. Наш протокол позволяет нам достичь относительно высокой чистоты и выхода за короткий период времени и с большим количеством жизнеспособных клеток, даже для небольших структур, таких как гипоталамус. В нашем исследовании изучается роль коммуникации нейронов микроглии в устойчивости или уязвимости к развитию метаболических заболеваний, и мы знаем, что люди чрезвычайно разнообразны в том, как они реагируют на диету.

И наши данные свидетельствуют о том, что микроглия может играть роль в этом разнообразии.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos

Explore More Videos

За этот месяц в JoVE выпуск 211