Протокол инсультной единицы мыши со стандартизированной неврологической оценкой для трансляционных исследований инсульта у мышей

Модель инсульта мыши с внутрисосудистой окклюзией хорошо транслирует современные методы тромбэктомии и реперфузии, однако она не транслирует эффективные клинические процедуры инсультного отделения. В этом видео мы демонстрируем нашу проверенную концепцию блокировки трансляционных ударов мыши и стандартизированную шкалу неврологической оценки. Первый метод нашего протокола относится к блоку удара мыши.

Ежедневно оценивайте клинический статус животного и рассчитывайте его оценку сертификации риска, суммируя баллы, как показано здесь. Отрегулируйте частоту и интенсивность поддержки в соответствии с RSS и фазой животного после инсульта. Для активной питательной поддержки возьмите и держите мышь мягко, но крепко за шерсть на шее.

Стабилизируйте ее щеку средним пальцем и проведите средним пальцем по направлению к носу мыши, прижмите ее к щеке и удерживайте позицию. Поместите кончик шприца между зубами по направлению к внутренней стороне щеки. Давайте примерно 40 или 50 микролитров гелевой пищи каждый раз.

Аккуратно верните мышь в клетку и повторите кормление через одну-две минуты. Далее демонстрируется фокусный компонент экспериментальной шкалы штриха. Начните с первого теста на парез передних конечностей.

Осторожно поднимите мышь от основания хвоста и осмотрите передние конечности. Ноль баллов за симметричное разгибание вперед и подвижность передних конечностей. Оцените один балл за легкое сгибание и уменьшенную подвижность контралезионной конечности.

Двойка баллов за легкое сгибание контралезионной конечности. Три балла за прилегание контралезионной конечности к туловищу и четыре балла за плегическую конечность без движения конечности или тела. Теперь оцените парез задних конечностей.

Продолжайте удерживать мышь за основание хвоста, как в одном из тестов. Осмотрите задние конечности, наберите ноль баллов за симметричное разгибание и движение задних конечностей. Один балл за асимметрию задних конечностей со значительно сниженным движением и асимметричным положением контрапораженной задней конечности.

Продолжайте держать мышь за основание хвоста, чтобы оценить симметрию ее туловища. Оцените ноль для нормального симметричного сгибания туловища в обе стороны и отсутствия постоянного сгибания туловища более чем на 30 градусов по вертикальной оси. Забейте один балл за выраженное сгибание туловища более чем на 30 градусов к вертикальной оси с преобладанием контралезионного поражения.

Теперь проверьте поведение по кругу. Аккуратно положите мышь на ровную поверхность и дайте ей свободно двигаться как минимум на одну минуту. Наблюдайте за его манерой движения.

Нулевой балл при быстром и линейном движении мыши. Забейте один балл за склонность поворачиваться в одну сторону, но не по ближним кругам. Оцените два балла за замкнутые непостоянные круги в одну сторону.

Оцените три балла за постоянные близкие круги в одну сторону и четыре балла за поворот, раскачивание или полное отсутствие движения. Теперь проверьте симметрию тела. Продолжайте с четвертого теста и позвольте мыши свободно перемещаться по ровной поверхности.

Наблюдайте за его носом и осью хвоста. Оценка ноль за нормальную осанку, поднятый туловище от скамьи и прямой хвост. Забейте один балл за небольшую асимметрию, когда тело слегка изгибается в одну сторону, а хвост согнут дистально.

Оцените две баллы за умеренную асимметрию, когда тело наклоняется или изгибается в противоположную сторону, а хвост проксимально изогнут. Три балла за выраженную асимметрию, когда тело согнуто, одна сторона лежит на скамье, а хвост явно согнут. И забить четыре за крайнюю асимметрию, когда тело согнуто и один бок постоянно лежит на скамейке.

Теперь перейдем к шестому испытанию и понаблюдайте за его походкой. Проверьте наличие дефицита моторики ходьбы. Оцените ноль за нормальную походку, когда конечности гибкие, симметричные и быстрые.

Забейте один балл за жесткую, негибкую и медленную походку без хромоты. Двойка за четкую хромоту с ассиметричными движениями. Забейте три балла за дрожь, дрифт или падение после легкого толчка.

Оцените четыре балла за отсутствие спонтанной ходьбы. Теперь тест на обязательное обхождение по кругу. Держите мышь за основание хвоста и слегка приподнимите его от поверхности, чтобы она ходила на передних конечностях.

Наблюдайте за его движением. Оценка равна нулю для нормального линейного движения. Забейте один балл за склонность к повороту в одну сторону.

Забейте два, когда мышь поворачивается в одну сторону на полных замкнутых кругах. Забейте три балла, когда он поворачивается и его движение медленное. И забить четыре, когда мышь не продвигается вперед и передняя часть ствола лежит на скамейке.

Здесь мы опишем, как проводить тест на осанку. Положите мышь на ладонь, как показано на видео, и аккуратно покачивайте ее вперед и назад. Обратите внимание, как мышь сохраняет вертикальное положение и балансирует против боковых сил, ее тело не соприкасается с ладонью или пальцами.

Видеозаписи с разными оценками этого теста бесполезны, поскольку его оценка в значительной степени зависит от обнаружения быстрых и тонких движений мыши, которые ощущаются рукой, а визуальных сигналов недостаточно для оценки. Для вашего удобства мы описываем каждую партитуру в виде текста. Теперь оцените положение передних конечностей.

Держите мышь сзади или от основания хвоста и направьте ее на луч в качестве цели, до которой нужно добраться. Обратите внимание на симметричное вытягивание. Затем, как только он схватит луч, осторожно оттяните его в сторону и наблюдайте за симметричным отпусканием передних конечностей.

Ноль баллов за симметричное вытягивание и освобождение. Оцените единицу за любую асимметрию. Теперь тест на сенсомоторный дефицит передних конечностей.

Держите мышь за спину, как показано, и последовательно стимулируйте передние лапы тонким кончиком. Ноль баллов за обычные быстрые хватательные движения. Оцените один балл за отсутствующий или явно запоздалый захват контрацепионной передней лапы.

Далее проверьте его хождение по лучу. Поместите мышь на балку параллельной ей оси нос-хвост и позвольте ей балансировать или ходить по лучу. Наблюдайте за равновесием, парезами конечностей и падениями.

Всегда держите руку ниже животного на случай, если оно упадет. Наберите ноль, когда мышь балансирует в устойчивой позе и идет к одной стороне луча. Забейте одного, когда он ухватится за сторону балки и не будет по ней ходить.

Имейте в виду, что может потребоваться некоторое время, чтобы сохранить равновесие на луче. Забейте два балла, когда одна конечность падает с балки. Забейте три балла, когда две конечности падают с балки.

Четыре балла, когда мышь пытается балансировать на луче, но падает через 40 секунд. Имейте в виду, что в этом тесте за мышью следует наблюдать в течение 60 секунд. Наберите пять баллов, если происходит падение в период от 20 до 40 секунд.

И забить шесть, когда он не пытается балансировать или висеть на бревне. Оцените чувствительность усов. Поместите мышь на открытую столешницу и успешно стимулируйте ее усы тонкой ватной палочкой с длинным кончиком.

Двигаясь под слепым углом, наблюдайте за его реакцией на поворот. Нулевой балл для нормального быстрого включения при двусторонней стимуляции. Оцените один балл за более медленный контралучионный ответ.

Двойка баллов за отсутствующий контралезионный ответ. Оценка три балла за отсутствие контралепии и более медленный ициллезионный ответ. И четыре балла за двусторонний отсутствующий ответ.

Тест на способность к лазанию. Поместите мышь в центр поверхности с резиновым покрытием под углом 45 градусов и наблюдайте за ее реакцией, пока она пытается подняться. Оценивайте ноль, когда мышь быстро поднимается на поверхность поверхности.

Забейте один, когда он поднимается с напряжением и присутствует слабость конечностей. Забейте два, когда он держится на склоне и не скользит и не поднимается. Забейте три балла, когда он соскальзывает вниз по склону, несмотря на усилия предотвратить падение.

И забейте четыре балла, когда он скользит, не прилагая усилий, чтобы предотвратить падение. Протокол инсультного блока мышей воспроизводимо поддерживает выживаемость мышей после нитевидной окклюзии средней мозговой артерии, поддерживая выживаемость на уровне 80%Фокальная ESS превосходна в выявлении неврологических дефицитов, восстановлении и поддержании чувствительности в течение шести месяцев после инсульта. В дополнение к фокальной ESS вы можете использовать тест на лестничной ступеньке для выявления и количественной оценки слабости как передних, так и задних конечностей на срок до шести месяцев.