Создание и анализ гистологических изображений с высокими параметрами с помощью гистопрофлоуцитометрии

Здесь описан метод, который может быть использован для визуализации пяти или более флуоресцентных параметров с помощью иммунофлуоресцентной микроскопии. Описан конвейер анализа для извлечения отдельных клеток из этих изображений и проведения анализа отдельных клеток с помощью стратегий проточной цитометрии, подобных гейтингу, которые могут идентифицировать подмножества клеток в срезах тканей.

Наша главная цель состоит в том, чтобы изучить, как клетки иммунной системы и глиальные клетки центральной нервной системы способствуют развитию и прогрессированию неврологических расстройств, таких как рассеянный склероз. Иммунофлуоресцентная микроскопия является стандартным и широко используемым методом в биологических дисциплинах и имеет важное значение для исследований в области неврологии и иммунологии. Одна из основных проблем, с которой сталкиваются исследователи, заключается в том, что иммунофлуоресцентная микроскопия, как правило, ограничена в количестве зондов, которые могут быть визуализированы за один раз, из-за ограничений обычных микроскопов.

В этом протоколе мы описываем метод, позволяющий увеличить количество зондов, которые многие микроскопы могут визуализировать одновременно, и предоставить конвейер анализа для обработки изображений, насыщенных информацией. Преимущество этого протокола заключается в том, что он может быть адаптирован ко многим широко доступным микроскопам и прост в исполнении, что делает мультиплексный гистологический анализ доступным для большего числа лабораторий.