Индукция ишемии-реперфузионного повреждения сетчатки на модели глаза мыши

Этот протокол моделирует ишемию-реперфузионное повреждение сетчатки в глазу мыши путем индуцирования ишемии сетчатки через канюляцию передней камеры и повышения внутриглазного давления с последующей нормализацией внутриглазного давления для инициирования реперфузии.

Наши исследования направлены на понимание того, как глаз естественным образом предотвращает воспаление. Наше исследование показало, что путь миерога имеет важное значение для подавления воспаления в глазу и способствует выживанию клеток в подвергшейся стрессу сетчатке. Это говорит о том, что инактивация пути миерога может быть полезна для лечения генеративных заболеваний сетчатки.

Этот протокол нормализует внутриглазное давление перед введением иглы, снижая травматизацию глазных структур и ограничивая повреждение ишемийско-реперфузионного компонента. Это усовершенствование сводит к минимуму экспериментальную изменчивость, вызванную физическими манипуляциями, повышая точность данной модели. Наше исследование продвигает уникальную концепцию терапии, а не нейтрализацию молекул для уменьшения симптомов в надежде, что клетки смогут выжить и вернуться к нормальной жизни.

Мы сосредоточились на изменении поведения клеток, участвующих в заболевании. Этот подход обладает большим потенциалом для обеспечения долгосрочных преимуществ и устойчивости к рецидивам хронических заболеваний, поскольку индуцируется нормальная клеточная активность. В нашей модели предложена усовершенствованная методика изучения ишемии-реперфузионного повреждения глаза мыши.

И это может дать более точное представление о том, как внутриглазные структуры будут реагировать на травму от длительного внутриглазного давления или от реперфузионной травмы. Для начала приготовьте шприцы со стерильным 0,9%-ным физиологическим раствором хлорида натрия, подключенными к инфузионной линии, и запорным краном с иглой 30-го калибра, прикрепленной к концу линии, по одному на каждую мышь, и поместите их на высоте 120 сантиметров над поверхностью скамейки. Затем промойте все пузырьки воздуха из магистрали.

Затем создайте кровать для стабилизации мыши, вырезав в губке углубление примерно шесть на три сантиметра и надежно поместив его в лунку из пенопласта или другую плоскую емкость. После обезболивания мыши расширьте радужную оболочку одной каплей 1% тропикамида и дайте пять минут для расширения. Затем надежно поместите мышь в губчатую подстилку под микроскопом.

Нанесите на глаза солевой раствор, чтобы смыть мусор или шерсть с поверхности глаз. С помощью щипцов без зубцов аккуратно зажмите один из глаз. Затем, при закрытой инфузионной линии, канюлировать переднюю камеру иглой примерно в двух миллиметрах от лимба.

Убедитесь, что игла прокалывает роговицу перпендикулярно периферической изогнутой поверхности роговицы, а затем слегка приплюснутой параллельно плоскости радужной оболочки. Поверните запорный кран, чтобы запустить инфузионную линию, и убедитесь, что нет утечки через рану роговицы. Обеспечьте постепенное растяжение роговицы по мере повышения внутриглазного давления.

С помощью тонометра проверьте, что внутриглазное давление повысилось до 90-100 миллиметров ртутного столба. Закрепите инфузионную линию лентой, следя за тем, чтобы игла не изменила положение и не начала протекать. Теперь нанесите на глаза офтальмологическую мазь, такую как бацитрацин, чтобы предотвратить сухость.

Поместите мышь подальше от микроскопа под нагревательную лампу, чтобы поддерживать нормальную температуру тела в течение 60 минут. Через 60 минут верните мышь в микроскоп. Опустите шприц с физиологическим раствором до уровня мыши, чтобы нормализовать внутриглазное давление.

Измерьте внутриглазное давление с помощью тонометра, чтобы убедиться, что оно близко к норме, около 20 миллиметров ртутного столба. После нормализации осторожно извлеките иглу, не допуская повреждения хрусталика или радужной оболочки. Смажьте глаза мыши офтальмологической антибактериальной мазью, например, бацитрацином ветеринарной офтальмологической мазью.

Следите за мышью на нагретой поверхности в течение одного-двух часов, пока она полностью не оправится от анестезии. После полного восстановления верните мышь в клетку. Сетчатка на седьмой день показала большее повреждение и потерю клеток по сравнению со вторым днем, что указывает на более тяжелую дегенерацию сетчатки с течением времени после ишемии и реперфузии.

Индивидуальные гистопатологические показатели были выше в большинстве слоев сетчатки на седьмой день по сравнению со вторым днем, что свидетельствует об увеличении патологических изменений с течением времени. Общие гистологические показатели были значительно выше на седьмой день, чем на второй, что указывает на заметное прогрессирование повреждения сетчатки.