Оптимизация пробоподготовки для криогенной электронной микроскопии

Подготовка образцов криогенной системы сталкивается с проблемами, которые могут ограничить ее эффективность, в частности, с неравномерным распределением частиц. Эта проблема часто приводит к плохому разрешению и снижению точности в новых сконструированных белковых структурах. Для преодоления неравномерного распределения частиц используются различные экспериментальные подходы, включая добавление в образец детергентов или мембранных имитаторов, модификацию пленки-опоры сетки и наклон определенного столика во время сбора данных.

В этом протоколе анализируется простой практический метод решения проблемы неравномерного распределения частиц за счет оптимизации пробоподготовки, что является нашим ориентиром для исследователей для эффективной иллюстрации структур макромолекул с помощью криогена. Для начала соберите объединенные белковые фракции, содержащие малый белок теплового шока MJ 16,5. Используйте центробежные фильтры с отсечкой молекулярной массы 50 килодальтон для концентрации фракций при четырех градусах Цельсия примерно до 65 миллиграммов.