Создание системы совместного культивирования органоидов колоректальных опухолей и инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TILs)

Исследование направлено на изучение взаимодействия инфильтрирующих опухоль лимфоцитов с органоидами колоректального рака, а также терапевтический потенциал терапии на основе TIL для персонализированного лечения колоректального рака. Наш протокол упростил профилактику инфильтрирующих опухоль лимфоцитов из лимфоцитов и позволяет их совместно культивировать с органоидами колоректального рака, преодолевая низкую эффективность и общую заболеваемость у пациентов.

[Рассказчик] Для начала подготовьте экспериментальные реактивы и лабораторную одежду к использованию. Затем трижды промыть ткань первичной опухоли колоректального рака пятью миллилитрами PBS с последующим выделением буфера для промывки тканей. Тканевыми ножницами измельчите ткань на мелкие фрагменты. Переложите измельченную ткань в буфер для пищеварения CRC. Инкубируйте образец на водяной бане, установленной при температуре 37 градусов Цельсия, в течение 30 минут до полного диссоциирования ткани. Затем добавьте равный объем Ad DMEM к переваренному образцу, чтобы нейтрализовать реакцию. Центрифугируйте суспензию при 380G в течение пяти минут при 25 градусах Цельсия. Теперь отбросьте надосадочную жидкость из центрифугированного образца с помощью пипетки. Пипеткой нанесите от одного до трех миллилитров предварительно подогретого эритроцитарного буфера для лизиса в гранулу и инкубируйте образец при температуре 25 градусов Цельсия в течение 10 минут. Добавьте равный объем Ad DMEM, чтобы завершить лизис. Центрифугируйте пробирку при 380G в течение пяти минут при температуре примерно 25 градусов Цельсия. После отбрасывания надосадочной жидкости повторно суспендируйте клеточную гранулу в соответствующем объеме Ad DMEM. Добавьте трипановый синий в суспензию для количественного определения жизнеспособных клеток и получения одноклеточной суспензии опухолевой ткани.