Мышиная двусторонняя почечная лимфаденэктомия

Мы изучаем транспортировку иммунных клеток из почечного лимфатического узла в почку и почечного антигена в дренажный лимфатический узел. Наш хирургический подход даёт уникальное преимущество — мы можем избирательно нарушать почечные лимфатические узлы, сохраняя при этом все остальные лимфатические узлы в хорошо переносимой модели долгосрочной выживаемости. Теперь, когда эта модель разработана, мы можем исследовать вклад почечных лимфатических узлов и иммунных ответов, а также то, как удаление этих узлов способствует иммунному повреждению почек.

Для начала положите анестезиированное животное на операционный стол и нанесите мазь. Используйте скотч, чтобы закрепить левую руку животного в верхнем направлении, а хвост — в нижнюю, чтобы создать расслабленную, но вытянутую позу. Сбрийте шерсть и трижды продезинфицируйте операционную зону.

После подтверждения глубины анестезии с помощью защитки пальца, сделайте косой разрез диаметром один сантиметр через кожу чуть ниже селезёнки, примерно на один сантиметр ниже последнего ребра. С помощью тупой вскрытия отдельте кожу от брюшной и грудной стенки и определите селезёнку внутри брюшной полости. Затем сделайте разрез диаметром один сантиметр через мышцу брюшной стенки, чуть ниже селезёнки, чтобы попасть в брюшинную полость.

Определите левую почку как гладкий орган, расположенный вдоль задней брюшной стенки прямо под селезёнкой. Используя два наклонных щипца, грубо рассечьте за левую почку, чтобы получить доступ к ретробрюшинеуму и мягко отразить левую почку в антеромедиальное направление. Определите жировую подушечку вокруг левого почечного лимфатического узла, который находится позади почки и выше почечных сосудов.

Определите и избегайте надпочечников, расположенных сверху, аорты сзади и цистерны хилии переднемедиально. С помощью тонко наконечных щипцов грубо разрезать капсулу лимфатического узла, чтобы отделить её от соседних сосудов, при этом обеспечивая мягкое противонатяжение с помощью наклонных щипцов. Используйте тонкие прямые щипцы, чтобы втянуть лимфатический узел выше.

Затем с помощью мелких ножниц резко разрезать постеромедиальные крепления. Осмотрите область, чтобы подтвердить гемостаз. Далее верните почку в нормальное анатомическое положение.

Закройте брюшную стенку, а затем кожу с помощью монофиламентного полипропиленового шва 6-0 в бегущем шве. Нанесите стерильный хирургический клей для герметизации раны. По желанию, для улучшения идентификации почечных лимфатических узлов, введите 10–20 микролитров стерильного, 5% синего красителя Evans в PBS в обе подушечки задних стоп перед почечной лимфаденэктомией.

В течение пяти минут после инъекции краситель достигает почечных лимфатических узлов через дренаж вдоль подвздошного лимфатического тракта. Переместить животное в левую боковую позицию декубита с левой стороной вниз. Используйте скотч, чтобы закрепить правую руку животного в верхнем направлении, а хвост — в нижней, чтобы сохранить расслабленную, но вытянутую осанку.

Теперь сделайте косой разрез на коже диаметром один сантиметр чуть ниже последнего ребра, который будет расположен чуть выше, чем слева. С помощью тупой вскрытия отдельте кожу от брюшной и грудной стенки. Затем сделайте разрез диаметром один сантиметр через мышцу брюшной стенки, чтобы попасть в брюшинную полость.

Определите правую почку — гладкий орган, расположенный вдоль задней брюшной стенки и чуть ниже печени. Используя два наклонных щипца, грубо разрезайте за правой почкой, чтобы получить доступ в ретробрюшинное пространство и отразить правую почку в антеромедиальное направление. Определите жировую подушечку, окружающую правый почечный лимфатический узел, который находится сзади почки и выше почечных сосудов.

Определите и избегайте надпочечников, расположенного выше лимфатического узла. Теперь, используя тонкие щипцы, грубо разрезайте капсулу лимфатического узла, чтобы отделить её от сосудов поблизости, при этом мягко противодействуя с помощью наклонных щипцов. Затем, с тонкими прямыми щипцами, вытяните лимфатические узлы сверху и резко разрежьте заднеомедиальные крепления тонкими ножницами.

Осмотрите территорию, чтобы убедиться в гемостазе. Наконец, верните правую почку в анатомическое положение. Закройте брюшную стенку и кожу в два слоя с помощью монофиламентного полипропиленового шва 6-0 по бегущему узору и нанесите стерильный хирургический клей на место разреза.

Потоковая цитометрия подтвердила успешное удаление лимфатических узлов во всех пяти образцах левой и пяти правых почечных лимфаденэктомии, каждый из которых показал более 50% живых клеток CD45-положительных, по сравнению с менее чем 2% в висцеральных жировых контролях. Количественная оценка CD45-положительных клеток показала значительную разницу между образцами левой и правой почечной лимфаденэктомии по сравнению с висцеральной жировой тканью без значимой разницы между левой и правой сторонами.