Сравнительное исследование содержания полисахаридов и антиоксидантной активности Hippophae rhamnoides subsp. sinensis и Hippophae gyantsensis

В этом исследовании сравнивается содержание полисахаридов и антиоксидантная активность между Hippophae rhamnoides sub. sinensis и Hippophae gyantsensis, чтобы выяснить их различия. Исследование является методологически обоснованным и устраняет пробел в литературе в отношении видоспецифичных различий в характеристиках полисахаридов.

Результаты этого исследования имеют важное значение для оценки качества и потенциального применения в фармацевтической отрасли. Для начала переложите пять граммов порошка образца облепихи в колбу с круглым дном объемом 250 миллилитров. Затем добавьте 50 миллилитров безводного этанола, и замочите его при комнатной температуре 25 градусов Цельсия на 24 часа.

На следующий день отфильтруйте замоченный порошок образца с помощью воронки Бюхнера, чтобы получить остатки фильтра. Остатки фильтра трижды промойте 50 миллилитрами деионизированной воды. Теперь перелейте обезжиренный остаток фильтра в высушенную колбу с круглым дном объемом 250 миллилитров.

Добавьте 150 миллилитров деионизированной воды в соотношении твердого и жидкого веществ один к 30 граммам на миллилитр. Дважды проведите экстракцию рефлюксом на водяной бане при температуре 80 градусов Цельсия в течение двух часов. Затем сконцентрируйте экстракт с помощью ротационного испарителя.

Храните концентрированный раствор в холодильнике при температуре четыре градуса Цельсия для последующего использования. Затем добавьте реагент Sevag в раствор сырого полисахарида в соотношении один к четырем объемам и поместите на магнитную мешалку. Затем переложите смесь в центрифужную пробирку объемом 50 миллилитров.

Центрифугируйте суспензию при 4 000 г в течение 15 минут, и соберите надосадочную жидкость. Чтобы концентрировать экстракт полисахаридов после удаления белка, добавьте безводный этанол в объемном соотношении один к трем для осаждения полисахаридов. Поместите смесь при температуре четыре градуса Цельсия на ночь.

На следующий день снимите верхний слой этанола. Переложите смесь в центрифужную пробирку объемом 50 миллилитров и центрифугируйте как раньше. Сублимационную сушку осадка до получения общего количества полисахаридов.

Переложите три грамма фенола в коричневую мерную колбу. Добавьте 50 миллилитров деионизированной воды, чтобы растворить фенол. Встряхните до однородности, затем наклейте этикетку и храните колбу для последующего использования.

Далее перелейте 10 миллиграммов безводной глюкозы в мерную колбу объемом 10 миллилитров. Добавьте деионизированную воду и тщательно встряхните смесь. Затем наклейте на колбу маркировку.

Для приготовления раствора испытуемого образца взвесьте пять миллиграмм лиофилизированных полисахаридов облепихи в мерные колбы. Добавьте деионизированную воду, чтобы довести каждый до конечного объема 50 миллилитров. Обработайте каждую смесь ультразвуком в течение 20 минут до полного растворения.

Разбавьте стандартный раствор глюкозы деионизированной водой до 0,1 миллиграмм на миллилитр. Затем с помощью микропипетки переложите 200, 300, 400, 500, 600 и 700 микролитров в шесть чистых пробирок. Добавьте чистую воду, чтобы довести общий объем каждого до одного миллилитра, и аккуратно перемешайте каждый раствор, чтобы обеспечить равномерное разбавление.

Добавьте в каждую пробирку по одному миллилитру 6%-ного раствора фенола и пяти миллилитрам серной кислоты и хорошо перемешайте. Переложите образцы в кюветы. Используйте чистую воду в качестве холостого и измерьте поглощение на 490 нанометрах с помощью УФ-видимого спектрофотометра в трех повторениях.

Для испытания на прецизионность приготовьте тестовый раствор. Проводят фенол-сернокислотную колориметрию. Определите поглощение и повторите шесть раз, чтобы рассчитать относительное стандартное отклонение.

Для испытания на стабильность приготовьте тестовый раствор. Выполняйте колориметрию через ноль, два, четыре, шесть, восемь и 10 часов после подготовки. Определите поглощение в вышеупомянутых временных точках, чтобы рассчитать относительное стандартное отклонение.

Для теста на повторяемость подготовьте шесть параллельных повторений образца. Проведите фенол-серную колориметрию, и определите абсорбцию в соответствии с установленной процедурой. Чтобы выполнить тест восстановления, подготовьте девять параллельных реплик тестового решения.

Добавьте эталонные объемы, эквивалентные 80, 100 и 120% от общего содержания полисахаридов. Затем выполняют фенол-сернокислотную колориметрию. Для определения содержания приготовьте образец раствора.

Проводят фенол-серную колориметрию по установленному методу. Затем определите впитываемость. Взвесьте 2,7 миллиграмма DPPH в пустую мерную колбу объемом 50 миллилитров.

Добавьте 50 миллилитров безводного этанола для растворения DPPH и приготовьте исходный раствор. Далее растворите пять миллиграммов витамина С в 10 миллилитрах деионизированной воды, чтобы приготовить раствор из расчета 0,5 миллиграмм на миллилитр. Разбавляйте этот раствор последовательно для приготовления тестовых растворов на витамин С.

Теперь растворите по пять миллиграммов каждого образца полисахарида облепихи в 10 миллилитрах деионизированной воды, чтобы получить 0,5 миллиграмма на миллилитр раствора. Разбавляйте эти растворы последовательно до получения тестовых концентраций. Используя раствор DPPH в качестве субстрата, подготовить тестовые группы в 96-луночной пластине.

Добавьте 150 микролитров воды и 50 микролитров DPPH для отрицательной контрольной группы, А0. Добавьте 150 микролитров образца или раствора витамина С и 50 микролитров DPPH для группы проб А1. Для контрольной группы проб А2 добавьте 150 микролитров образца и 50 микролитров безводного этанола. Дайте реакции протекать в темноте в течение 30 минут. Затем измерьте поглощение на 517 нанометрах.

Стандартная кривая глюкозы показала сильную линейную зависимость между абсорбцией и концентрацией в диапазоне от 0,02 до 0,07 миллиграмма на миллилитр. Средний выход полисахаридов у Hippophae gyantsensis был значительно выше, чем у подвида Hippophae rhamnoides sinensis. Прецизионный тест показал минимальное отклонение поглощения по шести измерениям, а RSD 0,21% указывает на высокую точность прибора.

Испытание на стабильность показало, что значения поглощения оставались неизменными в течение 10-часового периода, при этом значение RSD составило 0,45%, что подтверждает стабильность раствора образца. Тест на повторяемость показал стабильные значения поглощения по шести повторениям с RSD 0,5%, что подтверждает повторяемость метода. Эксперимент по восстановлению содержания глюкозы дал средний показатель восстановления 99,18%, что подтверждает точность метода.

Среднее содержание полисахаридов в подвиде Hippophae rhamnoides sinensis было значительно выше, чем в Hippophae gyantsensis. Hippophae gyantsensis проявлял несколько более высокую антиоксидантную активность, чем Hippophae rhamnoides подвида sinensis во всех испытуемых концентрациях. При 0,5 мг на миллилитр скорость клиренса DPPH Hippophae gyantsensis достигла 81,93%, в то время как Hippophae rhamnoides подвида sinensis достигла 75,17%