Улучшенное пространственное картирование слоёв желудочных мышц мышей с использованием модифицированной техники Swiss Roll

Наши исследования направлены на улучшение подготовки и анализа легкого желудка для проведения визуализации. Мы адаптировали технику Swiss Roll, изначально разработанную для мышиного кишечника, чтобы все основные области желудка, включая дно, тело и антрум, могли быть объединены в одну крио-секцию. Это позволяет визуализировать структуру желудка и клеточный состав рядом, сохраняя точную пространственную ориентацию и высокое качество изображения.

Желудок — это сложный орган с нежными тканями. Небольшие ошибки могут повредить клетки или исказить структуру, что делает высококачественную визуализацию и иммунное окрашивание непоследовательными. Наша техника Swiss roll решает эту задачу, сохраняя все области, включая двенадцатиперстную и пищевод в одном криоблоке, что делает эксперименты более надёжными и воспроизводимыми.

Для начала с помощью ножниц разрезайте вентральную брыжейку двенадцатиперстной кишки и желудка до штифта в корпусе. Используя трансферную пипетку, наполненную PBS, промывайте остатки пищи из просвета желудка. Аккуратно растяните открытый живот, чтобы получить ровное положение.

После короткой фиксации снова прижимите ткань плоско. С помощью ножниц обрезайте живот вдоль пунктирного контура, чтобы создать равномерную форму, подходящую для скручивания. Поместите обрезанную желудочную ткань на фильтрующую бумагу, увлажненную PBS.

Свернуть ткань в швейцарский рулон и закрепить её, вставив зубочистку в центр. После скрутки вставьте иглу 30-го калибра, чтобы закрепить её форму. Затем согните иглу под углом 90 градусов, чтобы стабилизировать свернутый желудок.

Зафиксируйте свернутую ткань в 4% параформальдегида при 4 градусах Цельсия в течение шести часов. Затем аккуратно снимите стабилизирующую иглу. Внедрить ткань в оптимальную температуру резки с помощью одноразовых форм для основания.

Затем заморозьте форму на сухом льду. После полной заморозки храните плесень при минус 80 градусах Цельсия. Новый метод позволил включить фундус, корпус, антрум, часть пищевода и двенадцатиперстную кишку в один срез гастрального швейцарского свалика у мышей.

Окрашивание гематоксилином и эозином в свалике желудочного швейцарского свалика выявило хорошо сохранившуюся архитектуру в дне, корпусе, муравиче, пищеводе и двенадцатиперстной клетке с чётко видимыми слоями слизистых, подслизистых и мышечных слоёв. Иммунофлуоресцентное окрашивание показало экспрессию KIT и ANO1 в интерстициальных клетках Кахала и экспрессию бета-тубулина три в кишечных нейронах, что подтвердило сохранение клеток в желудочно-швейцарском рулоне. Экспрессия KIT также была обнаружена в клетах панет и кубка в слизистой желудке, тогда как ANO1 был высоко экспрессирован в фундических колоннарных эпителиальных клетках.

Экспрессия бета-тубулина три наблюдалась в клетках желудка, эндокринной и слизи, а также в кишечных нейронах. Окрашивание миозинов с тяжелой цепью 11 подтвердило наличие гладкомышечных клеток и миофибробласта в слизистой желудочной слизистой форме, тогда как окрашивание E-кадгерином показало эпителиальные клетки, а окрашивание KIT снова отмечало интерстициальные клетки Кахаля. Швейцарская дорожная техника может продвинуть исследования региональных изменений в ткани желудка.

В отличие от традиционных методов, которые встраивают регионы отдельно, швейцарская техника ролла обрабатывает все желудочные области при одинаковых условиях, экономя как время, так и реагенты. Это делает её практичной и масштабируемой платформой для всестороннего анализа желудочной ткани как в состоянии здоровья, так и при заболеваниях.