Chica ex ovo cultura

Biology II

Your institution must subscribe to JoVE's Basic Biology collection to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 1 hour trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

Una fuerza del pollo (Gallus gallus domesticus) como un organismo modelo para la biología del desarrollo es que el embrión se desarrolla fuera de la hembra y es de fácil acceso para la manipulación experimental. Muchas de las técnicas permiten a los científicos examinar embriones de pollo dentro de la cáscara del huevo (en ovo), pero acceso embrionario puede limitarse en etapas posteriores del desarrollo. Afortunadamente, los polluelos también pueden ser cultivado ex ovo, o fuera de la cáscara del huevo. La principal ventaja a la ex ovo cultura es un mayor acceso a los tejidos que de lo contrario puede quedar obstruida por la cáscara o la orientación del pollito dentro del huevo, especialmente para los embriones en etapas posteriores de desarrollo.

Existen dos estrategias de principio a ex ovo cultura: cultura de yema de huevo entera y explante. Durante la cultura entera yema de huevo, la cáscara del huevo está agrietada y los contenidos se transfieren a un vaso de simple carcasa. Sin embargo, en explantes de métodos de cultivo, el embrión es suprimido de la yema y montado en el recipiente de la vivienda para mantener la tensión de la membrana, que es importante para el desarrollo normal.

Protocolos básicos para técnicas de yema de huevo entera y explante se prestará en este video, junto con una discusión de los pros y los contras de cultivo polluelos fuera de la cáscara. Finalmente, se discutirán aplicaciones experimentales del ex ovo cultura, demostrando cómo este enfoque se utiliza para mejorar el acceso al embrión para microscopía y manipulación genética de embriones en fase.

Cite this Video

JoVE Science Education Database. Biology II: Ratón, pez cebra y polluelo. Chica ex ovo cultura. JoVE, Cambridge, MA, (2017).

El pollo es un organismo modelo para el estudio de vías de desarrollo porque la mayor parte de su desarrollo se lleva a cabo fuera de la madre. Sin embargo, la cáscara del huevo impide el acceso al embrión para algunas formas de experimentación. Afortunadamente, pollos pueden incubarse fuera de la cáscara, o "ex ovo," con algún laboratorio comúnmente disponible fuentes. En este video, usted aprenderá acerca de los principios de la cultura ex ovo , procedimientos paso a paso por dos métodos diferentes de la cultura y aplicaciones de la técnica en estudios del desarrollo.

Antes hablando de cómo criar pollitos ex ovorepasemos algunos principios de la técnica. Dentro del huevo, el polluelo se convierte en estrecha asociación con la membrana vitelina que rodea la yema. El volumen restante se llena con albúmina o clara de huevo, que protege al embrión y sirve como una fuente de proteína.

Cultura fuera de la cáscara se puede realizar a través de la cultura de yema de huevo entero, con todo el contenido de huevo en un recipiente simple. Alternativamente, los tejidos embrionarios pueden ser suprimidos y cultivados ex ovo explante cultura. Dos de estas técnicas tienen ventajas sobre el uso de huevos en ventana.

En primer lugar, ventanas más tarde etapa pollo embriones es complicado debido a la presencia de muchos vasos sanguíneos cruciales, que se desarrollan dentro de las membranas que rodean el pollo. Esto hace que el método ex ovo preferible para trabajar con pollos en etapas posteriores.

En segundo lugar, porque puede caber dentro de plataformas de la proyección de imagen, ex ovo configuraciones cultura son más susceptibles de alta resolución imágenes.

Además, eliminación de embriones desde el shell expone a un mayor número de tejidos para las manipulaciones experimentales como la microcirugía y la microinyección.

Puesto que el pollo se basa en la cáscara del huevo para la protección y los minerales esenciales, supervivencia embrionaria sin esta estructura requiere algunos cuidados extra. Por ejemplo, vivienda debe estar diseñada para mantener un ambiente estéril, húmedo y nutrientes deben proporcionarse en forma de albúmina o medio de cultivo. Para la cultura a largo plazo, es necesaria como fuente de calcio cáscara machacada. Además, puesto que la tensión en las membranas apoyando el embrión es importante para el desarrollo normal, exitoso ex ovo cultura además depende de la vivienda que mantiene la morfología normal de la membrana.

Ahora que sabes lo básico, es hora de pollo hacia fuera! Para preparar huevos yema entera ex ovo cultura, comienzan por incubación a 37,5 ° C hasta justo antes de la etapa deseada.

Mientras esperas, prepara la cubierta. Placas de Petri, pesan barcos y hamacas son comúnmente usadas para mantener el contenido del huevo. En primer lugar, esterilizar todos los componentes por el tratamiento con luz UV o etanol.

Además, preparan una cámara exterior llenada de agua estéril para mantener la humedad durante la incubación.

Cuando los huevos estén listos, colóquelos en posición horizontal durante unos minutos para que el embrión se levanta a la tapa. Entonces romper la parte inferior de la cáscara y transferir cuidadosamente el contenido de huevo en la carcasa. Finalmente, cubrir el vaso de la vivienda para mantener la humedad y colocar la configuración en una incubadora hasta alcanzar la edad deseada para el proceso aguas abajo.

Una estrategia alternativa ex ovo , explante cultura, requiere unos pasos adicionales después de extraer el embrión de la cáscara.

En esta técnica, la membrana vitelina se separa suavemente la yema de huevo con el embrión en desarrollo con él.

Luego, se monta la membrana para mantener la tensión, que se puede hacer tirando el tejido alrededor de un anillo de cristal o por la simple adhesión a papel de filtro.

Después del montaje, se añade medio de cultivo para cubrir el tejido, y el embrión se coloca en una cámara humidificada.

Los embriones explanted pueden ser vuelto a una incubadora por hasta 24 horas de perfeccionamiento.

Después de aprender los principios y métodos de la cultura ex ovo , estamos listos para algún juego de aves de corral.

ex ovo cultura es particularmente útil cuando se necesita alterar genes en embriones mayores. Una aproximación a esto es la electroporación, en el que una corriente eléctrica se utiliza para permeabilizar las membranas celulares para la entrega de material genético. Puesto que los embriones ex ovo cultivadas también son muy accesibles para la proyección de imagen, la captación de material genético fácilmente puede ser validada a través de la proyección de imagen fluorescente de embriones enteros.

Imagen en tiempo real de la dinámica celular también es posible con ex ovo cultura. Las células cancerosas humanas pueden formar tumores por Co opción los vasos sanguíneos de las membranas corioalantoideas de chick, o CAM. Después de la formación de tumores, partículas fluorescentes pueden ser inyectadas directamente al torrente sanguíneo y realiza el seguimiento en tiempo real. Acumulación de partículas en el tejido tumoral puede ser utilizada como un indicador de la angiogénesis, la formación de nuevos vasos sanguíneos.

Aunque todo embriones pueden cultivarse mediante técnicas de explante, algunos experimentos requieren que se disecó tejidos embrionarios antes de la cultura. Por ejemplo, desarrollo de tejido neural puede ser suprimido y crecido sobre cubreobjetos de vidrio. Después de un período de incubación, se observa una población específica de células conocido como la cresta neural migran fuera del tejido. Tratamiento con agentes experimentales y lapso de tiempo la proyección de imagen puede utilizarse entonces para probar factores que controlan la migración de la célula.

Sólo ha visto a Guía de Zeus a chick ex ovo cultura. Este video cubre los principios de la cultura ex ovo , los fundamentos de la yema entera y explante métodos y algunas de las formas que estas técnicas se utilizan en los laboratorios de hoy. ¡Gracias por ver!

A subscription to JoVE is required to view this article.
You will only be able to see the first 20 seconds.

RECOMMEND JoVE

Applications