Indução neural é o primeiro passo na formação do cérebro. É um mecanismo pelo qual o nó de Hensen (organizador), instrui tecido adjacente a adotar um destino neural, ou seja, dar origem ao sistema nervoso. Este vídeo demonstra um ensaio para a indução neural no embrião de galinha.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Ensaio para Indução Neural no embrião de galinha
Neste artigo
Resumo
Resumo
O embrião de galinha é uma ferramenta valiosa no estudo do desenvolvimento embrionário precoce. Sua transparência, acessibilidade e facilidade de manipulação, torná-lo uma ferramenta ideal para estudar a formação inicial e padronização do sistema nervoso. Este vídeo demonstra como organizador do enxerto de tecido em um host, um método pelo qual nó s Hensen (o organizador do embrião de galinha) é enxertado em um ectoderma competente de acolhimento. O enxerto organizador instrui sobrejacente nd ve tecido de adotar um destino através de sinais neurais indução neural. Esse mecanismo é conhecido como indução neural, e constitui o passo inicial na formação do cérebro e da medula espinhal em amniotas. Este método é essencialmente utilizado para a caracterização de moléculas indução neural putativo no pinto. Este vídeo demonstra as diferentes etapas no ensaio para a indução neural; Primeiro, o embrião é Donnor explantado e colocou em um prato. Então, o embrião hospedeiro está preparado para a nova cultura. O enxerto é retirado e transplantado para o host margem área pelúcida. O host é cultivado para 18-22 hrs. A montagem é fixa e processados para outras aplicações (por exemplo, hibridização in situ). Este método foi originalmente concebido por Waddington
Protocolo
I. Visão geral esquemática:
Este vídeo demonstra as diferentes etapas no ensaio para a indução neural no embrião de galinha. Primeiro, o embrião hospedeiro é explantado na cultura New [NI1]. Então, o embrião é Donnor explantado em solução salina e do nó de Hensen (o "organizador" no bico) é marcado com corante fluorescente DII [NI2]. Nó de Hensen é retirado do embrião Donnor [NI3] e transplantadas para o embrião hospedeiro [NI4, NI5]. O embrião hospedeiro é então cultiva....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
Este vídeo demonstra as diferentes etapas na realização de um ensaio para a indução neural; Este ensaio é essencialmente usado para a caracterização da suposta indução neural em moléculas de bico, e, portanto, pode ser usado para uma ampla variedade de aplicações, que vão desde micromanipulations embriológico 1-4; 6 a desvendar novas cascatas de sinalização 7,8, todas visando a compreensão da etapa inicial na formação do cérebro e restante do sistema nervoso.
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Agradecimentos
DP é destinatário de Ruth Award Kirschstein DA021977 1F32-01A1 do Instituto Nacional sobre Abuso de Drogas. Este trabalho foi financiado pela M. Margaret Alkek Fundação RHF.
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários | |
|---|---|---|---|---|
| Ovos | Animal | Charles River Laboratories | Premium Fértil | Fertilizados, HH3+ (14 h) |
| Estereomicroscópio | Microscópio | Leica Microsystems | MZ9,5 ou similar | |
| Incubadora de Hibridização | Equipamento | Robbins Scientific, SciGene | M1000 | Utilize com uma placa de Petri de Pyrex invertida e 500 ml de água desionizada2O béquer |
| Incubadora Automática Marsh | Equipamento | Lyon | RX | |
| recipiente de Pyrex | ||||
| Relojoeiro’vidro de 50 mm | Ferramenta | VWR international | 66112-060 | |
| Anéis de vidro | Ferramenta | Instalações da planta física | cortar seções de 4 mm de espessura de tubo de vidro (27 mm de diâmetro externo, 25 mm de diâmetro interno). Não polir finamente. | |
| Pinça Curva (1) | Ferramenta | Electron Microscopy Sciences | 72991-4C | |
| Pinça (2) | Ferramenta | Fine Science Tools | 11002-13 | terminações retas usando pedra de afiar e 100 μl de óleo mineral |
| Tesoura fina | Ferramenta | Fine Science Tools | 14161-10 | |
| Placas de plástico | Ferramenta | Falcon BD | 353001 | |
| Bomba de borracha | Ferramenta | Electron Microscopy Sciences | 70980 | |
| DiI | Reagente | Invitrogen | D-282 | |
| Montagem do tubo do aspirador | Ferramenta | Sigma-Aldrich | A5177-5EA | |
| Micr–puxador de eletrodos | Equipamento | Sutter Instrument Co. | Sutter Instruments P-97 Flaming/Brown Micropipeta | |
| Pipeta Capilar de Pasteur | Ferramenta | Electron Microscopy Sciences | 70950-12 | borda arredondada sob chama |
| Câmara de cultura | Ferramenta | Pioneer Plastics | 030C | |
| Tubo microcapilar | Ferramenta | Sigma-Aldrich | P1049-1PAK | |
| Faca de microdissecação | Ferramenta | Fine Science Tools | 10056-12 | Usar para perfurar cavidades antes da hibridização in situ |
| Pinos de minuten de 0,2 mm de diâmetro | Ferramenta | Fine Science Tools | 26002-20 | Misture 1 parte do Agente de Cura com 9 partes da Base; incube durante a noite a 37 °C |
| Diethylpirrocarbonato (DEPC) | Reagente | Electron Microscopy Sciences | 15710 | |
| Agente de Cura e Base do Elastômero de Silicone Sylgard 184 | Dow Corning | 0001986475 | Misture 1 parte do Agente de Cura com 9 partes da Base; incube durante a noite a 37 °C | |
| Diethylpirrocarbonato (DEPC) | Acros Organics | 10025025 | Adicione 1 ml de DEPC a 1 l de PBS; agite; autoclave | |
| 16% PFA | Electron Microscopy Sciences | 15710 |
Referências
- Waddington, C. H. Experiments on the development of chick and duck embryos, cultivated in vitro. Phil. Trans. R. Soc. Lond. B. 221, 179-230 (1932).
- Waddington, C. H. Induction by the primitive streak and its derivatives in the chick. J. Exp. Biol
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
