Drosophila larvali NMJ Immunoistochimica

Summary

Questo protocollo illustra come eseguire immunoistochimica su sezionato larva di Drosophila.

Protocol

Prima di iniziare

1. Preparare le seguenti soluzioni: PBT (0,1% Triton X100 in PBS 1X), PBTB (0,2% BSA in PBT), e PBTN (2% in PBTB NGS).
2. Sezionare larve di Drosophila. Si prega di consultare Drosophila larvale Dissection NMJ.

Immunoistochimica

1. Spostare le larve in una provetta contenente 1,5 ml PBT. Lavare le larve due volte per 15 minuti in PBT. Nota: per lavare, posizionare il tubo di 1,5 ml di un mixer nutator. Asportare il liquido con un pippetor e sostituirlo con il liquido fresco.
2. Rimuovere il PBT. Lavare in PBTB due volte per 30 minuti.
3. Rimuovere il PB....

Discussion

Immunoistochimica (IHC) è di vitale importanza per lo studio della biologia NMJ perché consente la visualizzazione delle NMJ. Questo è ottenuto utilizzando anticorpi che riconoscono la membrana neuronale (ad esempio, HRP), il presynapse (ad esempio, CSP, SYT), e / o il postsynapse (ad esempio, DLG). Molecole di segnalazione, proteine ​​strutturali, nuove proteine ​​o di interesse possono anche essere colorati. Poi, i geni possono essere mutati o missexpressed e IHC in grado di rilevare perturbazione di struttura sinapti.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Stereomicroscopio “ Stemi” 2000	Carl Zeiss, Inc.	495101-9804-000
Sorgente luminosa KL 1500 LCD	Carl Zeiss, Inc.	000000-1063-181
Dumont SS Forcipe	Strumenti per la scienza fine	11200-33
Dumont #5 Forcipe	Strumenti per la scienza fine	11252-20
Adams™ Nutator Mixer	BD Biosciences	421105
No.1 Coltello di precisione	X-Acto	3201
No. 16 Lame	X-Acto	216
Reagente antisbiadimento ProLong Gold	Invitrogen	36930