このプロトコルは、解剖さショウジョウバエの幼虫の免疫組織化学を実行する方法を示しています。
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この記事について
サマリー
プロトコル
あなたが始める前に
- PBT（1X PBS中0.1％トリトンX100）、PBTB（0.2％PBTでBSA）、及びPBTN（PBTBの2％のNGS）：以下の溶液を調製。
- ショウジョウバエの幼虫を解剖。 ショウジョウバエ幼虫NMJの解剖を参照してください。
免疫組織化学
- PBTを含む1.5 mlチューブに幼虫を移動します。 PBTで15分間二回幼虫を洗ってください。注：洗浄するために、nutatorミキサーで1.5 mlチューブを置く。 pippetorで液体を除去し、新鮮な液体でそれを置き換えます。
- PBTを削除します。 30分間二回PBTBで洗浄する。
- PBTBを削除します。 15分間二回PBTNで洗浄する。
- 1時間または一晩4℃で室温でPBTNで希釈した一次抗体でインキュベートする。
- PBTBで二回リンスします。注：追加のソリューションをすすぎ、速やかに削除する。
- PBTBで15分間2回洗浄する。
- 30分間PBTNで洗浄する。
- PBTNで希釈した（とあなたがいずれかを使用している場合標識した1次抗体）を二次抗体でインキュベートする。
- 室温で1.5時間アルミホイルとイン....
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ディスカッション
それはNMJの可視化を可能にするため、免疫組織化学（IHC）は、NMJ生物学の研究に不可欠です。これは、神経細胞膜（例えば、HRP）、前シナプス（例えば、CSP、SYT）、および/またはpostsynapse（例えば、DLG）を認識する抗体を使用することによって実現されます。シグナル伝達分子、構造タンパク質、または興味の新規タンパク質も染色することができます。その後、遺伝子が変異またはmissexpressed、およびIHCは、シナプスの構造および/または神経シグナリングの摂動を検出することができますすることができます。
ショウジョウバエのNMJは、その基本構造と機能を点灯初期の研究以来、大きな人気を得ている。1-4 ショウジョウバエ NMJの研究で確認されている分子の多くは脊椎動物で保存されている。4したがって、洞察力は、研究を通して学んだショウジョウバエNMJの多くのシステムにおけるシナプス生物学にも適用可能である。いくつかの可能なアプリケーションでは、シナプスの発達、可塑性、および神経疾患に関与.......
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 実体顕微鏡 “Stemi” 2000 | Carl Zeiss, Inc. | 495101-9804-000 | |
| 光源 KL 1500 LCD | Carl Zeiss, Inc. | 000000-1063-181 | |
| Dumont SSピンセット | Fine Science Tools | 11200-33 | |
| Dumont #5ピンセット | Fine Science Tools | 11252-20 | |
| Adams™ ニュテーターミキサー | BD Biosciences | 421105 | |
| No.1 精密ナイフ | X-Acto | 3201 | |
| No. 16替刃 | X-Acto | 216 | |
| ProLong Gold 抗退色剤 | Invitrogen | 36930 |
参考文献
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on ident....
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再版と許可
