Deze video documenten groot volume (≥ 20 L) filtratie van microbiële biomassa, variërend van 0.22μm en 2.7μm in diameter, uit het water kolom.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Grote Volume (20L +) Filtratie van Coastal Zeewater Monsters
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
De workflow begint met het verzamelen van de kust mariene wateren voor de downstream microbiële gemeenschap, nutriënten-en trace gas analyses. Voor deze methode werden monsters verzameld vanaf het dek van de HMS John Strickland die actief zijn in Saanich Inlet. Deze video documenten groot volume (≥ 20 L) filtratie van microbiële biomassa, variërend van 0.22μm en 2.7μm in diameter, uit het water kolom. Twee 20L monsters kunnen gelijktijdig worden gefilterd met een enkele pomp unit uitgerust met vier draaibare koppen. Filtratie is gedaan in het veld op lange reizen, of direct bij terugkeer voor dagtochten. Het is belangrijk om op te nemen van de hoeveelheid water die door elke sterivex filter unit. Om te voorkomen dat biofilmvorming tussen de monsterneming reizen, moeten alle filtratie-apparatuur worden gespoeld met verdund HCl en gedeïoniseerd water en geautoclaveerd onmiddellijk na gebruik. Deze procedure duurt ongeveer 5 uur, plus een extra uur voor het opruimen.
Protocol
- Opzetten van filtratie apparatuur
- Voor het instellen van het filtreerapparaat, gebruik een pincet in een klasse GF / D-filter te plaatsen in het voorfilter wooneenheid. Losjes vast de behuizing met de hand. Als een vuistregel, niet te strak of het apparaat zal lekken zodra de pompen begint.
- Vervang de mandfles dop met de geautoclaveerde dop en de bijgevoegde slang door zorgvuldig het inbrengen van de interne slang in de mandfles, zonder aan te raken. Gebruik indien nodig een pincet om de slang te begeleiden in de mandfles.
- Passeren van de externe slang door de peristaltische pomp.
- Bevestig voorfilter woningen a....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Het is noodzakelijk om te vegen van banken en pompen met een vochtige handdoek na gebruik aan een slepende sporen van zout water die anders zouden aantasten apparatuur te verwijderen. Hoewel de procedure is eenvoudig, kan de benodigde tijd uitgebreid worden afhankelijk van de concentratie van biomassa of afval in het monster wordt gefilterd.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te melden.
Dankbetuigingen
We willen graag de Canadese Stichting voor Innovatie, de British Columbia Kennis Ontwikkelingsfonds en de National Sciences and Engineering Research Council (NSERC) van Canada te bedanken voor de ondersteuning van lopende studies op een laag zuurstofgehalte regio's van kust-en open water van de oceaan. DAW werd ondersteund door beurzen uit NSERC, Killam en de TULA basis gefinancierd Centrum voor Microbiële diversiteit en evolutie.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen | |
|---|---|---|---|---|
| Peristaltische pomp | Masterflex (Cole Palmer) | 77913-20, 77200-62, 77200-04 | ||
| Tygon LFL-slangen | Masterflex (Cole Palmer) | 06429-24 | Voor filtratieapparaat | |
| Slangklemmen | Cole-Parmer | 0683204 | Voor filtratieapparaat | |
| 1/4” x 3/16” pijpadapters | Cole-Parmer | 31702-20 | Voor filtratieapparaat | |
| Polypropyleen voorfilterbehuizing | ADVANTEC | 501200 | Voor filtratieapparaat | |
| Metalen luer-koppeling (Slanguiteinde naar mannelijke luer lock) | Cole-Parmer | 31507-27 | Voor filtratieapparaat | |
| 2“ Magneten | Voor filtratieapparaat | |||
| 3-poorts carboy-doppen | Voor filtratieapparaat | |||
| GV 0.22 μm STERIVIX-filters | EMD Millipore | SVGV01R5 | ||
| 47 mm diameter 2.7 μm GF/D-filters | Whatman, GE Healthcare | 1823047 | ||
| Lysisbuffer | Reagens | 0.75 M sucrose, 40 mM EDTA, 50 mM Tris (pH 8.3) | ||
| 0.1 % HCl | Reagens | Voor spoelen na filtratie | ||
| Geautoclaveerd water | Reagens | Voor spoelen na filtratie |
Herprints en machtigingen
