Nous décrivons une méthode rapide et efficace pour la purification des mitochondries de la levure Saccharomyces cerevisiae. Cette méthode permet l'isolement à haut rendement des mitochondries pures qui sont essentiellement exempt de contamination par d'autres organites et conservent leur intégrité structurale et fonctionnelle après leur purification.
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Article de méthode
Purification des mitochondries de cellules de levure
Dans cet article
Résumé
Résumé
Les mitochondries sont le site principal de production d'ATP au cours du métabolisme aérobie dans eucaryotes non photosynthétiques cellules
Protocole
Matériel et méthodes
Les souches de levures et de conditions de croissance
La souche de type sauvage BY4742 (MATa his3Δ1 leu2Δ0 lys2Δ0 ura3Δ0) a été cultivé en milieu riche YEPD (extrait de levure 1%, 2% de peptone, glucose 2%). Les cellules ont été cultivées à 30 ° C avec rotation agitation à 200 rpm dans des erlenmeyers à un "flacon de volume / moyen volume" ratio de 5:1.
Isolement de la fraction mitochondriale brut
- Cultivez 1 L de la culture souche sauvage BY4742 pendant 48 h.
- Verser la culture dans 500 ml tubes à centrifuger Nalgene. Équilibrer la charg....
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Discussion
Cette méthode permet l'isolement à haut rendement des mitochondries pur à partir de cellules de levure. Les mitochondries purifiées par cette méthode sont essentiellement libres de contamination par d'autres organites et conservent leur intégrité structurale et fonctionnelle après leur purification. Les rendements méthode décrite mitochondries qui sont adaptés à la cellule sans reconstitution des processus essentiels mitochondriale. Ces mitochondries très purs peuvent aussi être utilisées pour l'analyse de l.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n'ont rien à divulguer.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par des subventions des IRSC et le CRSNG du Canada. VIT est une nouvelle chercheuse des IRSC et président de Concordia recherche universitaire en génomique, biologie cellulaire et le vieillissement.
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Références
- Voet, D., Voet, J. G. Biochemistry. , 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc. Hoboken, NJ. (2004).
- Suen, D. -F., Norris, K. L., Youle, R. J. Mitochondrial dynamics and apoptosis. Genes Dev. 22, 1577-1590 (2008).
- Cheng, W. C., Berman, S. B., Ivanovska, I., Jonas, E. A., Lee, S. J., Chen, Y., Kaczmarek, L. K., Pineda, F. &, Hardwick, J. M.
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