Este video muestra la forma de medir la invasión de las células a través de insertos de cultivo celular utilizando una metodología basada en fluorescencia.
La característica distintiva de las células metastásicas es su capacidad para invadir a través de la membrana basal y migrar a otras partes del cuerpo. Las células deben ser capaces de secretar tanto proteasas que rompen la membrana basal, así como la migración con el fin de ser invasivo. BD tumor BioCoat Sistema invasión provee a las células con las condiciones que permitan la evaluación de sus propiedades invasivas<em> In vitro</em<sup> 1,2</sup>. Se trata de un FluoroBlok BD Falcon 24 Multiwell Plate de Inserción con una membrana de 8,0 micras de poro PET tamaño que ha sido uniformemente cubierto con BD Matrigel matriz. Esta capa uniforme de BD Matrigel matriz sirve como una membrana basal reconstituida<em> In vitro</em> Ofrecer una verdadera barrera para no invasiva, mientras que las células que presentan una estructura de la proteína adecuada para estudiar la invasión. El proceso de recubrimiento obstruye los poros de la membrana, el bloqueo no invasiva las células migren a través de la membrana. En contraste, las células invasoras son capaces de desprenderse de y migran a través de la membrana de recubrimiento. La cuantificación de la invasión de células se puede lograr ya sea por invasión de etiquetado antes o después de las células con un tinte fluorescente como DiIC<sub> 12</sub> (3) o calceína AM, respectivamente, y la medición de la fluorescencia de las células invasoras. Ya que la membrana BD FluoroBlok efectivamente bloquea el paso de la luz desde 490 hasta 700 nm con una eficiencia> 99%, con fluorescencia células marcadas que no han invadido no son detectados por un lector de placas de abajo a la lectura de fluorescencia. Sin embargo, las células que han invadido a la parte inferior de la membrana ya no están protegidos de la fuente de luz y son detectados con el lector de placas respectivas. Este video muestra una celda de punto final de la invasión de ensayo, utilizando calceína AM para detectar células invadidas.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
BD BioCoat Tumor Invasion System | BD Biosciences | 354165 or 354166 | ||
HT-1080 and NIH/3T3 cells | ATCC | |||
Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM; serum-free) | ||||
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline, without calcium and magnesium (DPBS) | ||||
BD Falcon FluoroBlok 24-Multiwell Insert System to be used as a cell migration control | BD Biosciences | 351157 or 351158 | ||
5% Fetal Bovine Serum in DMEM | ||||
BD Calcein AM Fluorescent Dye | BD Biosciences | 354216 or 354217 | ||
Hanks’ Balanced Salt Solution (HBSS) | ||||
BD Falcon 24-well plates for post cell invasion labeling | BD Biosciences | 351147 | ||
Fluorescence plate reader with bottom reading capabilities | PerkinElmer EnVision (R), TECAN Infinite (R), Molecular Devices SpectraMax (R), BioTek Synergy (TM), BMG LABTECH PHERAstar. |