وهذا الفيديو لشرح كيفية الحصول على hemocytes (خلايا الدم) من الحبار قصير الذيل في هاواي ،<em> Euprymna scolopes</em> للاستخدام في خلية التصاق المقايسات البيولوجية والجرثومية. وسوف يلطخ Hemocytes مع صبغة الفلورسنت ويتعرضون لGFP المسمى البكتيريا.
Abstract
الدراسات المتعلقة بدور جهاز المناعة في التوسط بين الإشارات الجزيئية البكتيريا النافعة ومضيفيهم ، في السنوات الأخيرة ، وقدمت مساهمات كبيرة لفهمنا لتطور المشترك للحقيقيات النوى مع مجهريات البقعة بهم. لعلاقة تكافلية بين الحبار قصير الذيل في هاواي ،<em> Euprymna scolopes</em> وبكتيريا bioluminescent<em> الضمة fischeri</em> وقد استخدمت كنظام نموذج لفهم آثار البكتيريا المفيدة حول التنمية الحيوانية. وقد أظهرت الدراسات الحديثة أن مثل بلعم hemocytes ، المكون الوحيد الخلوي للنظام المضيف الحبار المناعة الفطرية ، ولعب على الارجح دورا مهما في التوسط في إنشاء وصيانة هذه الجمعيات. وهذا البروتوكول لشرح كيفية الحصول على hemocytes من<em> E. scolopes</em> ومن ثم استخدام هذه الخلايا في المقايسات ملزمة البكتيرية. الكبار الحبار وتخدير لأول مرة أمام يتم جمعها بواسطة حقنة الدملمف من الاوعية الدموية الرأسية الرئيسية. يتم التقيد hemocytes المضيف ، الواردة في الدملمف المستخرج ، لcoverslips زجاج غرف ويتعرض بعد ذلك إلى اللون الأخضر التكافلية البروتين المسمى الفلورسنت<em> الضمة fischeri</em> وغير التكافلية ،<em> الضمة harveyi</em>. وcounterstained في hemocytes مع صبغة الفلورسنت (خلية المقتفي أورانج ، Invitrogen) ومن ثم تصور باستخدام المجهر الفلورسنت.
Protocol
إعداد 500 مليليتر من 0.22 تعقيم مياه البحر فلتر ميكرون الاصطناعي (FSW ؛ ملوحة 35 جزء في الألف). تصفية مياه البحر مصطنعة أو طبيعية من خلال مرشح 0.22 ميكرون ميكرون لإزالة الجزيئات والبكتيريا. تخدير شخص بالغ واحد قصير الذيل هاواي الحبار …
Discussion
الدراسات المتعلقة بدور جهاز المناعة في التوسط بين الإشارات الجزيئية البكتيريا النافعة ومضيفيهم ، في السنوات الأخيرة ، وقدمت مساهمات كبيرة لفهمنا لتطور المشترك للحقيقيات النوى مع مجهريات البقعة بهم. وقد أثبت نظام الحبار / ضمة نفسها كنظام نموذج الانقياد للإجابة على ?…
Acknowledgements
مصادر التمويل : جامعة كونيتيكت مؤسسة البحوث وقسم البيولوجيا الجزيئية والخلوية لSVN ، سيغما شى غرانت في والمعونة من البحوث وH. R. انطونيو وMajorie رومانو زمالة دراسات عليا التعليم لAJC
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Lab-Tek chambered #1.0 borosilicate coverglass system (8-chambers)
Collins, A. J., Nyholm, S. V. Obtaining Hemocytes from the Hawaiian Bobtail Squid Euprymna scolopes and Observing their Adherence to Symbiotic and Non-Symbiotic Bacteria. J. Vis. Exp. (36), e1714, doi:10.3791/1714 (2010).