Cette vidéo vous montrera comment obtenir des hémocytes (cellules sanguines) de l'Hawaiian calmars bobtail, Scolopes Euprymna Pour une utilisation dans des dosages biologiques et d'adhésion cellulaire bactérienne. Hémocytes seront colorées avec un colorant fluorescent et exposés à la GFP-étiquetée bactéries.
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Article de méthode
Obtention hémocytes de l'Hawaiian Bobtail Squid Scolopes Euprymna Et en observant leur adhésion aux bactéries symbiotiques et non symbiotiques
Dans cet article
Résumé
Résumé
Les études concernant le rôle du système immunitaire dans la médiation de la signalisation moléculaire entre les bactéries bénéfiques et leurs hôtes ont, ces dernières années, apporté une contribution significative à notre compréhension de la co-évolution des eucaryotes avec leur microflore. L'association symbiotique entre les calmars Hawaiian Bobtail,
Protocole
- Préparer 500 ml de 0,22 um, stérilisée par filtration d'eau de mer artificielle (FSW; salinité 35 ppt). Filtre d'eau de mer artificielle ou naturelle à travers un filtre de 0,22 micron um pour éliminer les particules et les bactéries.
- Anesthetize un adulte Hawaiian bobtail squid (Euprymna scolopes) en le plaçant dans une solution à 2% d'éthanol dans FSW. Placez l'animal dans l'anesthésie pendant environ 10 minutes. Le calmar cessera de natation et ne sera pas répondre activement au toucher. La respiration continue, indiquée par le mouvement du manteau, et l'activité devrait encore chromatophore être observées.
- Placez calmars avec la face ventrale vers le....
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Discussion
Les études concernant le rôle du système immunitaire dans la médiation de la signalisation moléculaire entre les bactéries bénéfiques et leurs hôtes ont, ces dernières années, apporté une contribution significative à notre compréhension de la co-évolution des eucaryotes avec leur microflore. Le système squid / vibrion a fait ses preuves en tant que système modèle souple pour répondre aux questions fondamentales dans ce domaine 2,3,5,6,8. La lumière de l'organe de scolopes calmars Euprymna
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Remerciements
Les sources de financement: Université du Connecticut Research Foundation et le Département de Biologie Moléculaire et Cellulaire à SVN, Sigma Xi Grant-in-Aid de recherche et Antonio H. et R. Majorie
Romano Graduate Education Fellowship pour AJC
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Système de lamelles à chambres en verre borosilicaté #1.0 (8 chambres) | Thermo Fisher Scientific, Inc. | 155411 | |
| Seringue d'insuline de 1 ml sans latex, 26,5 G | BD Biosciences | C34551 | |
| Cell Tracker Orange | Invitrogen | C34551 | |
| Microscope SteREO Discovery V20 | Carl Zeiss, Inc. | ||
| Microscope confocal SP2 | Leica Microsystems |
Références
- Koropatnick, T. A., Kimbell, J. R., McFall-Ngai, M. J. Responses of host hemocytes during the initiation of the squid-Vibrio symbiosis. Biol. Bull. 212, 29-39 (2007).
- McFall-Ngai, M. J. Unseen forces: the influence of bacteria on animal development. Dev. Biol.
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Réimpressions et autorisations
