Bu makale, tavşan retina ve parçacık GFP veya retina ganglion hücrelerinin içine Subselüler belirteçleri çeşitli kodlama plazmid aracılı gen transferi diseksiyonu ve inkübasyon göstermektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Yetişkin Tavşan Retina Organotipik Kültürü
Bu makalede
Özet
Özet
Fonksiyonel sinir dokularının Organotipik kültür sistemleri nörobiyolojik araştırma önemli araçlardır. İdeal olarak, böyle bir sistemin görüntüleme teknikleri, genetik manipülasyon ve elektrofizyolojik kayıt ile uyumlu olmalıdır. Burada hiçbir özel ekipman ve çok az bakım gerektirir yetişkin tavşan retina için basit bir interfaz doku kültürü sistemi mevcut. Biz tavşan retina ve parçacık GFP veya retina ganglion hücrelerinin içine Subselüler belirteçleri çeşitli kodlama plazmid aracılı gen transferi diseksiyon ve inkübasyon göstermektedir. Tavşan retina, bu şekilde genel anatomik yapısı çok az değişiklik ya da bireysel morfolojisi ganglion ve amacrine hücreleri ile 6 gün kadar canlı tutulabilir kültür.
Protokol
Yapma gen tabancası mermi (GOLD)
- 100X PVP (0.5mg/ml) 100% EtOH olun.
- BioRad 1.6 Mikron microcarrier altın, 30 mg tartılır ve 1.5 ml Eppendorf tüp içine yerleştirin.
- 0.5-3 mg / mg plazmid altın bir konsantrasyon vermek için gerekli plazmid miktarını hesaplayın ve altın microcarriers ile plazmid tüpün içine yerleştirin. Gerekirse birkaç plazmid birleştirin.
- Distile su ile 100 ul plazmid hacim kazandırın.
- Tüpe 100 ul 0.05M spermidin ekleyin. Vorteks tüp 30 saniye.
- Vortex tam hızda 1 dakika. 3-5 dakika sonikasyon ..
- 15 dakika boyunca Biorad PDS-1000/He aparat Tefzel boru uzunluğu uygun bir kurulayın. <....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
1. Bu yöntem ile ne yapabilirim?
- Hücre morfolojisi açıkça bakın.
- Bunları kaydetmek için Etiket hücreleri.
- Eksprese PSD95 gibi proteinler, ama aynı zamanda hücre yanıtı modüle diğer proteinlerin, örneğin iyon kanalları, reseptörler.
- Hızlı inhibitör RNA'lar.
2. Ne kadar süre yetişkin retina tutabilir mi?
- 4 gün yetişkin tavşan için hiç sorun değil. Altı gün sonra hücreler "hasta" bakmak, yani aksonlar geri çekmek, güvenilmez hale geldi dendritler şişlik ve hafi.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Kaynaklar
- Landreth,, Agranoff, B. W. Explant culture of adult goldfish retina: a model for the study of CNS regeneration. Brain Res. 161, 39-55 (1979).
- Smalheiser, N. R., Crain, S. M., Bornstein, M. B. Development of ganglion cells and their axons ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
