Method Article

実験的転移アッセイ

DOI:

10.3791/1942

⸱

August 24th, 2010

 , 
1Department of Biomedical Genetics, University of Rochester Medical Center, 2Department of Dermatology, University of Rochester Medical Center

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

この記事では、ヒト癌細胞株の転移能を決定するために使用される実験的転移アッセイの手順を説明します。

Abstract

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転移は、がん患者における死亡の主要な原因である。転移のメカニズムを理解するために、実験的転移アッセイは、免疫​​不全マウスを用いて設立されました。この記事では、サンプル調製、静脈内注射、および肺転移から培養細胞を含むこの検定に関わる手順を、群を区別。簡単に言えば、ヒト癌細胞の予め決められた数を調製した

Protocol

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1。サンプル準備

  1. 成長因子やFBS（例えば、MC - 1細胞​​を10％FBS含有DMEM）で、その特定のメディアで〜70％コンフルエントに細胞を成長させる。プレートから培地を吸引除去し、穏やかに1 × PBS（塩化ナトリウム8gの/ L、塩化カリウム0.2 g / Lの、1.15のNa 2 HPOのG / L 4 · 7H 2 O、KH 2 POを0.2g / Lで数回洗浄4、pHは7.3）。
  2. 吸引PBSとヴェルセンの0.05％トリプシン（フェノールレッドおよび1 × PBS、pH7.2中EDTA - Naは0.2 g / Lの0.014グラム/ L）2 mLを加える。静かにプレートから細胞の剥離を容易にするためにプレートを揺らし。顕微鏡下で細胞を観察。それは、通常、切断するセル2-5分かかります。
  3. トリプシン活性をクエンチし、50mLのファルコンチューブに細胞を収集するメディアを含むFBS（または大豆トリプシン阻害剤）の十分なボリュームを追加します。血球計を用いて細胞を数える。きれいな血球計算盤の上に細胞懸濁液の10μLをロード。 mL当たりの細胞数は、10 4を掛けた5つの正方形のそれぞれの＃セルの平均値に等しくなります。
  4. 3分間ベンチトップ遠心機で1000 RPM（または〜200 × g）で細胞を遠心分離します。

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Discussion

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転移は、がん患者における死亡の主要な原因である。彼らの主要な遺伝子座、循環への参入（管内）、循環（血管外漏出）から、これらの終了、および遠隔臓器の生存と成長から癌細胞の剥離：これは、4つの主要な手順が含まれます。人間の転移はゆっくりとしたプロセスとみなされ、多くの場合、待ち時間の年後に明示​​される。タイムリーにその進行を勉強するために、上記の比較的迅速な実験的なアッセイは、免疫不全マウスに設立されました。4設立以来、それは別の転移能力を持つ細胞を分離するために効果的に使用されている、アップまたはダウンレギュレート中にある遺伝子を同定転移1,2,5、および転移の間にこれらの遺伝子の因果役割をテストする3。

このアッセイで最も挑戦的なステップは、尾静脈に細胞を注入することです。それは注入するスキルを習得する実践を取ります。ベテランの研究者のために、成功した注入を達成する前にいくつかの試験は非常に一般的です。マウスの尾の静脈は右それらの中間の非常に薄いと、挿入針です簡単ではありません。簡単にランプを使用して尾をウォームア.......

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Acknowledgements

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このプロトコルは、検査の結果、博士リチャードハインズ（MIT）の研究室で最初に最適化されていました。資金調達はNYSTEMアイデア賞（LXへ）とルースL.キルシュシュタイン国立リサーチサービス賞（LXへの）によって提供されます。

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
DMEMInvitrogen10313-021
FBSHycloneSH30088.03
HBSSInvitrogen14175-095
NaClSigma-AldrichS9888
KClMallinckrodt Baker Inc.6838-04
NA2 HPO4.7H2OMallinckrodt Baker Inc.7896-04
KH2PO4Mallinckrodt Baker Inc.7100-12
フェノールレッドSigma-AldrichP3532
EDTA-NAEMD Millipore4010
トリパンブルーInvitrogen15250-061
トリプシン 2.5%Invitrogen15090-046
エタノール超高純度200-CSGP
50 ml ファルコンチューブVWR インターナショナル89039-656
マイクロ遠心チューブAxygen ScientificMCT-175-C
ファルコン70μm Cell StrainerBD Biosciences352350
5ml Falcon Culture TubeVWR international60818-576
HemacytometerHausser Scientific15170-208
1 ml syringeBD Biosciences329650
30 ½ ゲージ針BD Biosciences 305106
マウス拘束具Plas Labs Inc.551-BSRR
手術用ハサミフィッシャー・サイエンティフィ08-940
鉗子フィッシャー・サイエンティフィ08-902
解剖顕微鏡ニコンインスツルメンツSMZ1500
卓上型遠心分離機サーモフィッシャーサイエンティフィ
ック ック ック75003491

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Xu, L. Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases. Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).
  2. Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. Genomic analysis of metastasis r....

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