L'esame dei telomeri G-Struttura in aggetto Trypanosoma brucei</em
Summary
I telomeri sono essenziali per la stabilità dei telomeri dei cromosomi e la G-sbalzo struttura è essenziale per la telomerasi mediato conservazione dei telomeri. Abbiamo recentemente adottato due metodi per individuare i telomeri G-sbalzo struttura<em> Trypanosoma brucei</em>, Che sono nativi in gel di ibridazione e ligation-mediata primer extension, che saranno descritti.
Abstract
Il G-sbalzo struttura dei telomeri è stato identificato negli eucarioti tra cui lievito, vertebrati, e Trypanosoma brucei. Esso funge da substrato per la telomerasi per de novo sintesi del DNA dei telomeri e quindi è importante per il mantenimento dei telomeri. T. brucei è un protozoo parassita che causa la malattia del sonno negli esseri umani e nagana nei bovini. Una volta infettato dei mammiferi, T. cellula brucei interruttori regolarmente il suo antigene di superficie di eludere attacco immunitario dell'ospite. Abbiamo recentemente dimostrato che il T. brucei struttura dei telomeri svolge un ruolo essenziale nella regolazione dell'espressione genica antigene di superficie, che è critica per T. brucei patogenesi. Tuttavia, T. brucei struttura dei telomeri non è stata ampiamente studiata a causa delle limitazioni dei metodi per l'analisi di questa struttura specializzata. Ora abbiamo adottato con successo il nativo in gel ibridazione e ligation-mediata metodi fondo estensione per l'esame del telomero G-sbalzo struttura e un metodo di legatura adattatore per la determinazione del terminale dei telomeri nucleotide in T. brucei cellule. Qui, verranno descritti i protocolli in dettaglio e confrontare i loro diversi vantaggi e limitazioni.
Protocol
Discussion
Trypanosoma brucei causa la malattia del sonno negli esseri umani. Questa malattia, se non trattata, è inevitabilmente fatale. T. cellule brucei a ospiti mammiferi subiscono variazione antigenica regolarmente in modo da eludere l'attacco immunitario dell'ospite 7. Quindi è molto difficile da eliminare T. cellule brucei una volta l'infezione è stabilita. Abbiamo recentemente dimostrato che i telomeri svolgono un ruolo importante nella regolazione dell…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vorremmo ringraziare il Dott. Carolyn Prezzo per discussioni scientifiche e suggerimenti penetranti. Questo lavoro è supportato dal NIH concedere AI066095 (PI: Bibo Li).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| SeaKem LE Agarose | Lonza | 50004 | ||
| Agarose Type VII (low melting agarose) | Sigma | A4018 | ||
| Proteinase K, recombinant, PCR grade | Roche Diagnostic | 03 115801001 | ||
| Exo I | NEB | M0293 | ||
| Exo T | NEB | M0265 | ||
| T7 exonuclease | NEB | M0263 | ||
| T4 DNA polymerase | NEB | M0203 | ||
| QIAquick nucleotide removal kit | Qiagen | 28304 |
References
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