线虫幻灯片准备：在阿加垫上安装动物的方法

Overview

在 C.elegans的实时成像过程中，一个糖垫可以用来保持线虫静止，而不会损坏或干燥线虫。 此视频描述了如何为显微镜准备一个简单的安装垫。

Protocol

本协议摘自Teoh等人的《研究细胞结构和细胞形态学的定量方法》，J.Vis.Exp.（2019年）。

为成像准备幻灯片

1. 在微波安全瓶中准备 3-4% 的带 v agarose 库存（100 mL 超纯水中 3-4 克）。
   注： 阿加可以代替同浓度的蔗糖。
2. 小心地将蔗糖融化在微波炉中，注意不要煮沸，直到所有糖溶解（清除溶液）。将溶液保持在70°C，以防止凝固。
   注： 阿加罗斯股票可以使用几次。如果阿加罗斯已经凝固，请在使用前重新加热。
3. 使用巴斯德移液器，将一滴融化的糖放在显微镜滑梯上。
   注： 避免在 agar 滴中出现气泡，因为这些气泡会破坏垫子的完整性。
4. 立即用另一个显微镜滑梯压下糖滴，轻轻地将糖压平到两个幻灯片之间的垫子中。
   注： 在这个阶段，任何剩余的气泡都应该去除。否则，应该制作新的幻灯片，因为动物很容易陷入气泡中。按滑梯时，避免阿加溢出到侧面。
5. 让阿加罗斯晾干1分钟。
6. 小心地将两个幻灯片分开，以避免对 agarose 造成损坏，同时将凝固的垫子留在幻灯片上。
   注： 带糖垫的滑梯应始终在实验前准备新鲜，因为它们可以干涸。确保糖垫具有一致的厚度。垫子上不应有气泡或裂缝，因为这可能会干扰成像。
7. 将 0.05% 盐酸四甲酸四甲二烯（麻醉剂）的小滴（5-10 μL）添加到糖垫的中心。
8. 使用热消毒精选，在溶液干涸之前，快速将大约 10 - 15 只动物从股票板转移到麻醉液滴。避免转移过多的 OP50 细菌，因为这样可以使溶液多云，从而干扰成像。
   注： 如果麻醉液在采摘时干燥，只需将第二滴 0.05% 四甲基盐酸滴到动物身上即可。动物往往躺在麻醉液的侧面。
9. 应用盖片，将其定位在糖垫正上方，然后轻轻地将其放下。这将防止气泡的形成。不要对盖子滑动施加压力，因为这可能会压碎动物。
10. 用应变名称标记幻灯片。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Agar-agar	Merck	1.01614.1000
Agarose	Invitrogen	16500-500
Glass coverslips #1	Thermo scientifique	MENCS22221GP
Glass coverslips #1.5	Zeiss	474030-9000-000	Made by SCHOTT
Glass slides	Thermo scientifique	MENS41104A/40
Pasteur pipette	Corning	CLS7095D5X-200EA
Platinum wire	Sigma	267201-2G
Tetramisole hydrochloride	Sigma	L9756-5G