In questo video, evidenziamo una dissezione dell’intestino drosofilo adulto e la raccolta di moscerini adatti alla dissociazione a una cellula e facs al fine di isolare le cellule staminali intestinali.
Protocol
Questo protocollo è un estratto da Tauc et al., Isolando le cellule staminali intestinali dai moscerini della Drosophila adulta della FACS per studiare il comportamento delle cellule staminali durante l’invecchiamento, J. Vis. Exp. (2014). NOTA: Se questo protocollo viene utilizzato per la prima volta per isolare gli ISC mediante ordinamento FAC, i seguenti controlli sono obbligatori per impostare inizialmente correttamente i parametri…
Materials
Forceps: Dumont, Inox Biologie #5
Fine Science Tools
11252-20
SefarNitex 03-150um/38 (35 µm nylon mesh)
Sefar
3A03-0150-102-00
Falcon 5 ml Round Bottom Polystyrene Test Tube with Cell Strainer Snap Cap
Corning
352235
Polymax 1040
Heidolph
543-42210-00
Albumin from bovine serum (BSA)
Sigma
A4503-50G
0.5% Trypsin-EDTA
Invitrogen
15400-054
Trypsin obtained from a different company most likely has a different activity and the duration of the trypsin digest has to be adjusted accordingly.
SYTOX Blue Dead Cell Stain for flow cytometry
Life Technologies
S34857
RNAlater Stabilization Solution
Life Technologies
AM7023
Other solutions, e.g., Trizol can be used for subsequent RNA isolation