En este video, destacamos una disección del intestino adulto de Drosophila y la colección de midguts adecuados para la disociación unicelular y FACS con el fin de aislar las células madre intestinales.
Protocol
Este protocolo es un extracto de Tauc et al., Isolating Intestinal Stem Cells from Adult Drosophila Midguts por FACS to Study Stem Cell Behavior During Aging, J. Vis. Exp. (2014). NOTA: Si este protocolo se utiliza por primera vez para aislar los ISC por ordenación FAC, los siguientes controles son obligatorios para establecer inicialmente los parámetros FACS correctamente: Células disociadas del tipo salvaje (por ej…
Materials
Forceps: Dumont, Inox Biologie #5
Fine Science Tools
11252-20
SefarNitex 03-150um/38 (35 µm nylon mesh)
Sefar
3A03-0150-102-00
Falcon 5 ml Round Bottom Polystyrene Test Tube with Cell Strainer Snap Cap
Corning
352235
Polymax 1040
Heidolph
543-42210-00
Albumin from bovine serum (BSA)
Sigma
A4503-50G
0.5% Trypsin-EDTA
Invitrogen
15400-054
Trypsin obtained from a different company most likely has a different activity and the duration of the trypsin digest has to be adjusted accordingly.
SYTOX Blue Dead Cell Stain for flow cytometry
Life Technologies
S34857
RNAlater Stabilization Solution
Life Technologies
AM7023
Other solutions, e.g., Trizol can be used for subsequent RNA isolation