Dissekering av Midgut från en vuxenfluga: En metod för att isolera matsmältningssystemet

Published: April 30, 2023

Abstract

Källa: Tauc, H.M., et al. Isolera intestinala stamceller från vuxna Drosophila Midguts av FACS för att studera stamcellsbeteende under åldrande. J. Vis. Exp. (2014).

I den här videon belyser vi en dissekering av den vuxna Drosophila tarmen och samling av midguts lämplig för encells dissociation och FACS för att isolera intestinala stamceller.

Protocol

Detta protokoll är ett utdrag från Tauc et al., Isolera intestinala stamceller från vuxna Drosophila Midguts av FACS för att studera stamcellsbeteende under åldrande, J. Vis. Exp. (2014). OBS: Om detta protokoll används för första gången för att isolera ISC genom FAC-sortering är följande kontroller obligatoriska för att initialt ställa in FACS-parametrarna korrekt: Dissocierade celler från vildtyp (t.ex….

Materials

Forceps: Dumont, Inox Biologie #5 Fine Science Tools 11252-20
SefarNitex 03-150um/38 (35 µm nylon mesh) Sefar 3A03-0150-102-00
Falcon 5 ml Round Bottom Polystyrene Test Tube with Cell Strainer Snap Cap Corning 352235
Polymax 1040 Heidolph 543-42210-00
Albumin from bovine serum (BSA) Sigma A4503-50G
0.5% Trypsin-EDTA Invitrogen 15400-054 Trypsin obtained from a different company most likely has a different activity
and the duration of the trypsin digest has to be adjusted accordingly.
SYTOX Blue Dead Cell Stain for flow cytometry Life Technologies S34857
RNAlater Stabilization Solution Life Technologies AM7023 Other solutions, e.g., Trizol can be used for subsequent RNA isolation
FACSAria II cell sorter Becton Dickinson Turn on one hour prior to sorting

Play Video

Cite This Article
Dissection of the Midgut from an Adult Fly: A Method for Isolating the Digestive Tract. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20150, doi: (2023).

View Video