Dissekering av Midgut från en vuxenfluga: En metod för att isolera matsmältningssystemet

Abstract

Källa: Tauc, H.M., et al. Isolera intestinala stamceller från vuxna Drosophila Midguts av FACS för att studera stamcellsbeteende under åldrande. J. Vis. Exp. (2014).

I den här videon belyser vi en dissekering av den vuxna Drosophila tarmen och samling av midguts lämplig för encells dissociation och FACS för att isolera intestinala stamceller.

Protocol

Detta protokoll är ett utdrag från Tauc et al., Isolera intestinala stamceller från vuxna Drosophila Midguts av FACS för att studera stamcellsbeteende under åldrande, J. Vis. Exp. (2014). OBS: Om detta protokoll används för första gången för att isolera ISC genom FAC-sortering är följande kontroller obligatoriska för att initialt ställa in FACS-parametrarna korrekt: Dissocierade celler från vildtyp (t.ex….

Materials

Forceps: Dumont, Inox Biologie #5	Fine Science Tools	11252-20
SefarNitex 03-150um/38 (35 µm nylon mesh)	Sefar	3A03-0150-102-00
Falcon 5 ml Round Bottom Polystyrene Test Tube with Cell Strainer Snap Cap	Corning	352235
Polymax 1040	Heidolph	543-42210-00
Albumin from bovine serum (BSA)	Sigma	A4503-50G
0.5% Trypsin-EDTA	Invitrogen	15400-054	Trypsin obtained from a different company most likely has a different activity and the duration of the trypsin digest has to be adjusted accordingly.
SYTOX Blue Dead Cell Stain for flow cytometry	Life Technologies	S34857
RNAlater Stabilization Solution	Life Technologies	AM7023	Other solutions, e.g., Trizol can be used for subsequent RNA isolation
FACSAria II cell sorter	Becton Dickinson		Turn on one hour prior to sorting