هذا البروتوكول هو مقتطف من Tong et al ، Electrotaxis القائم على الموائع الدقيقة للتحليل الكمي عند الطلب لحركة Caenorhabditis elegans ، J. Vis. Exp. (2013).
< p class = "jove_title" >
1. تجربة التاكسي الكهربائي
- ضع القناة المصغرة على المسرح (يفضل أن تكون متحركة) في المجهر مع كاميرا مثبتة متصلة بشاشة (الشكل 1).
- قم بتوصيل مصدر الطاقة أو أسلاك إخراج مكبر الصوت بأقطاب القناة الدقيقة. يكفي مصدر طاقة تيار مستمر بسيط إذا كانت إشارة التيار المستمر مطلوبة فقط ، لكن مكبر الصوت المتصل بمولد الوظائف يسمح بتطبيق إشارات التيار المستمر والتيار المتردد النبضية أيضا.
- قم بتوصيل أنبوب إخراج القناة الدقيقة بحقنة يمكن التخلص منها. اغمر فم أنبوب المدخل في المخزن المؤقت الفسيولوجي M9 واستنشق السائل برفق في القناة عن طريق تطبيق ضغط سلبي داخل المحقنة (إما يدويا أو باستخدام مضخة حقنة). عندما تمتلئ أنابيب المدخل والمخرج ب M9 ، افصل المحقنة عن الأنبوب. قم بتسوية كلا الأنبوبين إلى نفس الارتفاع لمنع التدفق الهيدروستاتيكي.
- قم بتطبيق جهد تيار مستمر على القناة وتأكد من أن المقاومة (R = V / I) حوالي 0.6 MΩ (لقناة صغيرة بطول 50 مم وعرض 0.3 مم وعمق ~ 0.1 مم).
- إذا كنت راضيا عن سلامة القناة، فاتبع الخطوات المذكورة أعلاه لتحميل الديدان من نظام تعليق مخفف في القناة.
- افصل المحقنة وقم بمعالجة التدفق هيدروستاتيكيا عن طريق ضبط الارتفاع النسبي للأنابيب. استخدم هذه الطريقة لوضع دودة في وسط القناة ثم وضع كلا الأنبوبين بشكل مسطح على نفس الارتفاع.
- اضبط مصدر الطاقة على الجهد المناسب: 4-12 فولت / سم لحيوانات المرحلة L3 ، و 4-10 فولت / سم ل L4s ، و 2-4 فولت / سم للشباب. قم بتنشيط الإشارة الكهربائية واترك 1 دقيقة من التعرض المسبق للدودة للتأقلم مع المجال. يجب أن تبدأ الدودة في التحرك نحو الكاثود. عند مرور الدقيقة، استخدم الكاميرا لبدء التسجيل.
- بالنسبة لتجارب التيار المتردد والتيار المستمر النبضي ، يمكن اعتماد الحد الأقصى للمجال الكهربائي المستجيب من الأعلى ويمكن تعديل التردد ودورة عمل الإشارة حسب الرغبة.
- عند الانتهاء من التجربة ، قم بإزالة جميع السوائل (والديدان) من القناة ، واشطفها ب dH20 ، واترك الجهاز على لوح ساخن عند 125 درجة مئوية حتى يجف.
- استخرج البيانات الحركية من مقاطع الفيديو المسجلة يدويا باستخدام NIH ImageJ (http://rsbweb.nih.gov/ij/) أو برنامج تتبع الفيروسات المتنقلة المخصص المستند إلى MATLAB.
