电解分析：观察C.埃莱甘斯运动的方法

Overview

研究人员可以通过应用蠕虫感知和响应的电场来触发 C. elegans 的按需运动。 此视频介绍了电触觉行为，并显示了在微流体设备中完成的示例协议。

Protocol

该协议是通等人的摘录，基于微流体的电塔西斯，用于对卡诺哈布迪蒂斯的运动进行按需定量分析，J.Vis. Exp。(2013). 

1. 电解实验

1. 将微型通道放在显微镜的舞台上（最好是 XY 可移动），并安装与监视器相连的摄像机（图 1）。
2. 将电源或放大器的输出线连接到微通道的电极。只要需要直流信号，简单的直流电源就足够了，但连接到函数发生器的放大器也允许应用脉冲直流和交流信号。
3. 将微通道的输出管连接到一次性注射器上。将入口管的口腔浸入 M9 生理缓冲区，通过在注射器内施加负压（手动或使用注射器泵）轻轻将液体吸入通道。当入口和出口管都充满 M9 时，将注射器与管子断开。将两根管子调平到相同的高度，以防止水文静态驱动的流量。
4. 将直流电压施加到通道上，并确保电阻（R=V/I）约为 0.6 MΩ（长 50 毫米、宽 0.3 毫米和深 0.1 毫米微通道）。
5. 如果对通道的完整性感到满意，请按照上述步骤将蠕虫从稀释的悬架加载到通道中。
6. 通过调整管子的相对高度来断开注射器和水文静态地操纵流量。使用此方法将蠕虫放置在通道中心，然后将两根管子平放在相同的高程处。
7. 将电源设置为适当的电压：L3 级动物为 4-12 V/cm，L4 为 4-10 V/cm，年轻人为 2-4 V/cm。激活电信号，让蠕虫在暴露前 1 分钟适应现场。蠕虫应该开始向阴极移动。当分钟过去了，使用相机开始录制。
8. 对于交流和脉冲直流实验，可以从上面采用最大响应电场，信号的频率和工作周期可以根据需要进行调节。
9. 实验完成后，从通道中取出所有液体（和蠕虫），用 dH_{2 0}冲洗，并将设备放在 125 °C 的热板上晾干。
10. 使用 NIH 图像J（http://rsbweb.nih.gov/ij/）或自定义基于 MATLAB 的蠕虫跟踪软件手动从录制的视频中提取轨迹数据。

Representative Results

图1。线虫电解检测微流体筛选平台示意图。