אלקטרוטקסיס אסאי: שיטה להתבונן תנועה ב C. אלגנס

Overview

חוקרים יכולים להפעיל תנועה לפי דרישה ב- C. elegans על ידי החלת שדה חשמלי שתולעים חשות ומגיבות אליו.  סרטון וידאו זה מציג התנהגות אלקטרו-טקטית ומציג פרוטוקול לדוגמה שנעשה בהתקן מיקרופלואידי.

Protocol

פרוטוקול זה הוא קטע מתוך טונג ואח ',אלקטרוטקסיס מבוסס מיקרופלואידי לניתוח כמותי לפי דרישה של תנועה ' Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2013). 

1. ניסוי אלקטרוטקסיס

1. הניחו את המיקרו-שנל על הבמה (רצוי XY-movable) של מיקרוסקופ עם מצלמה רכובה המחוברת לצג (איור 1).
2. חבר את חוטי הפלט של ספק הכוח או המגבר לאלקטרודות של המיקרו-שנל. ספק כוח DC פשוט מספיק אם רק אות DC רצוי, אבל מגבר המחובר למחולל פונקציה מאפשר יישום של אותות DC ו- AC פעמו גם כן.
3. חבר את צינור התפוקה של המיקרו-שנל למזרק חד פעמי. לטבול את הפה של צינור הכניסה במאגר פיזיולוגי M9 בעדינות לשאוף נוזל לתוך התעלה על ידי הפעלת לחץ שלילי בתוך המזרק (או באופן ידני או באמצעות משאבת מזרק). כאשר צינורות המפרצון והשקע מלאים שניהם ב- M9, נתק את המזרק מהצינור. רמה שני הצינורות לאותו גובה כדי למנוע זרימה מונעת הידרוסטטית.
4. החל מתח DC על הערוץ ולהבטיח כי ההתנגדות (R = V / I) הוא סביב 0.6 MΩ (עבור 50 מ"מ אורך, 0.3 מ"מ רוחב ~ 0.1 מ"מ עמוק microchannel).
5. אם אתה מרוצה מהשלמות של הערוץ, בצע את השלבים לעיל כדי לטעון תולעים מהשעיה מדוללת לתוך הערוץ.
6. נתק את המזרק ותפעל את הזרימה באופן הידרוסטטי על ידי התאמת הגובה היחסי של הצינורות. השתמש בשיטה זו כדי למקם תולעת במרכז התעלה ולאחר מכן להניח את שני הצינורות שטוח באותו גובה.
7. הגדר את ספק הכוח למתח המתאים: 4-12 V/cm עבור חיות שלב L3, 4-10 V / cm עבור L4s, ו 2-4 V / ס"מ לצעירים. הפעל את האות החשמלי ואפשר דקה של חשיפה מוקדמת לתולעת להתאקלם לשדה. התולעת צריכה להתחיל לנוע לכיוון הקתודה. לאחר שהדקה חלפה, השתמש במצלמה כדי להתחיל בהקלטה.
8. עבור AC וניסויי DC פעמו, השדה החשמלי התגובה המרבי ניתן לאמץ מלמעלה ותדירות מחזור החובה של האות ניתן לווסת לפי הצורך.
9. בסיום הניסוי, מוציאים את כל הנוזלים (והתולעים) מהתעלה, שוטפים אותו ב-dH₂0 ומשאירים את המכשיר על צלחת חמה ב-125 מעלות צלזיוס לייבוש.
10. לחלץ נתוני locomotory מסרטונים מוקלטים באופן ידני באמצעות NIH ImageJ (http://rsbweb.nih.gov/ij/) או תוכנה מותאמת אישית למעקב תולעים מבוסס MATLAB.

Representative Results

איור 1. סכמטי של פלטפורמת סינון מיקרופלואידית לבדיקת אלקטרוטקסיס נמטודית.