פרוטוקול זה הוא קטע מתוך Tong et al, Microfluidic-based Electrotaxis for On-demand Quantitative Analysis of Caenorhabditis elegans' Locomotion, J. Vis. Exp. (2013).
1. ניסוי באלקטרוטקסים
- מקם את המיקרו-ערוץ על במה (רצוי XY-movable) של מיקרוסקופ עם מצלמה מותקנת המחוברת לצג (איור 1).
- חבר את חוטי היציאה של ספק הכוח או המגבר לאלקטרודות של המיקרו-ערוץ. ספק כוח DC פשוט מספיק אם רוצים רק אות DC, אך מגבר המחובר לגנרטור פונקציות מאפשר יישום של אותות DC ו- AC פועמים גם כן.
- חבר את צינור הפלט של המיקרו-ערוץ למזרק חד פעמי. יש לטבול את פי צינור הכניסה בחיץ פיזיולוגי M9 ולשאוף בעדינות נוזלים לתוך התעלה על ידי הפעלת לחץ שלילי בתוך המזרק (באופן ידני או באמצעות משאבת מזרק). כאשר צינורות הכניסה והיציאה מלאים שניהם ב-M9, נתקו את המזרק מהצינור. פלסו את שני הצינורות לאותו גובה כדי למנוע זרימה הידרוסטטית.
- החל מתח DC על התעלה וודא שההתנגדות (R = V / I) היא סביב 0.6 MΩ (עבור אורך 50 מ"מ, רוחב 0.3 מ"מ ומיקרו-ערוץ ~ 0.1 מ"מ עומק).
- אם אתה מרוצה מתקינות הערוץ, בצע את השלבים לעיל כדי לטעון תולעים מתרחיף מדולל לתוך הערוץ.
- נתקו את המזרק ובצעו מניפולציה הידרוסטטית של הזרימה על ידי התאמת הגובה היחסי של הצינורות. השתמש בשיטה זו כדי למקם תולעת במרכז התעלה ולאחר מכן להניח את שני הצינורות שטוחים באותו גובה.
- כוונו את ספק הכוח למתח המתאים: 4-12 וולט/ס"מ לחיות במה L3, 4-10 וולט/ס"מ ל-L4 ו-2-4 וולט/ס"מ לצעירים. הפעל את האות החשמלי ואפשר דקה אחת של חשיפה מוקדמת לתולעת להתאקלם בשדה. התולעת צריכה להתחיל לנוע לכיוון הקתודה. כאשר הדקה חלפה, השתמש במצלמה כדי להתחיל להקליט.
- עבור ניסויי AC ו- DC פולסים, ניתן לאמץ את השדה החשמלי המגיב המרבי מלמעלה וניתן לווסת את התדר ומחזור העבודה של האות לפי הצורך.
- בסיום הניסוי, הסר את כל הנוזלים (והתולעים) מהתעלה, שטוף אותה עם dH20, והשאר את המכשיר על צלחת חמה ב 125 ° C לייבוש.
- חלץ נתונים מוטוריים מסרטונים מוקלטים באופן ידני באמצעות NIH ImageJ (>http://rsbweb.nih.gov/ij/) או תוכנת מעקב תולעים מותאמת אישית מבוססת MATLAB.
