Электротаксис Анализ: Метод наблюдения за движением в C. elegans

Overview

Исследователи могут вызвать движение по требованию в C. elegans, применяя электрическое поле, что черви смысле и реагировать на.  Это видео вводит электротаксическое поведение и показывает образец протокола, который делается в микрофлюидных устройств.

Protocol

Этот протокол является выдержкой из Тонг и др., Микрофлюидной основе Электротаксис по требованию Количественный анализ Caenorhabditis elegans' Locomotion, J. Vis. Exp. (2013).

1. Эксперимент по электротаксису

1. Поместите микроканал на сцену (желательно XY-подвижный) микроскопа с установленной камерой, подключенной к монитору(рисунок 1).
2. Подключите провода питания или усилителя к электродам микроканал. Простой источник питания постоянного тока достаточен при желании только сигнала постоянного тока, но усилитель, подключенный к генератору функций, позволяет также использовать импульсные сигналы постоянного тока и переменного тока.
3. Прикрепите выходную трубку микроканал к одноразовой шприцу. Погрузите рот входной трубки в физиологический буфер M9 и аккуратно стремитесь к жидкости в канал, применяя отрицательное давление внутри шприца (либо вручную, либо с помощью шприц-насоса). Когда входные и розетки трубки заполнены M9, отключить шприц от трубки. Уровень обеих труб на той же высоте, чтобы предотвратить гидростатически управляемый поток.
4. Нанесите напряжение постоянного тока на канал и убедитесь, что сопротивление (R'V/I) составляет около 0,6 МЗ (для микроканал длиной 50 мм, шириной 0,3 мм и глубиной 0,1 мм).
5. Если вы удовлетворены целостностью канала, следуйте вышеуказанным шагам, чтобы загрузить червей из разбавленной подвески в канал.
6. Отключите шприц и гидростатически манипулируйте потоком, регулируя относительную высоту труб. Используйте этот метод, чтобы поместить червя в центре канала, а затем заложить обе трубы плоские на той же высоте.
7. Установите источник питания до соответствующего напряжения: 4-12 В/см для животных стадии L3, 4-10 В/см для L4 и 2-4 В/см для молодых взрослых. Активируйте электрический сигнал и позвольте 1 мин предварительной экспозиции для червя акклиматизироваться к полю. Червь должен начать движение к катоду. Когда минута прошла, используйте камеру, чтобы начать запись.
8. Для экспериментов переменного тока и импульсного постоянного тока максимально отзывчивое электрическое поле может быть принято сверху, а цикл частоты и службы сигнала может модулироваться по желанию.
9. Когда эксперимент закончен, удалите всю жидкость (и червей) из канала, промойте его dH_{2 0,}и оставить устройство на горячей пластине при 125 градусов по Цельсию, чтобы высохнуть.
10. Извлекайте локомоторные данные из записанных видео вручную с помощью NIH ImageJ(http://rsbweb.nih.gov/ij/)или пользовательского программного обеспечения для отслеживания червей на основе MATLAB.

Representative Results

Рисунок 1. Схема микрофлюидной скрининговой платформы для анализа нематодного электротаксиса.