C. Elegans Bevægelsessporing: En metode til vurdering af bevægelse i orme

Abstract

Kilde: Davies, A. G. et al. En analyse til måling af virkningerne af ethanol på Bevægelseshastigheden af Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2015). 

I denne video beskrives brugen af video- og sporingssoftware til at optage ormebevægelser i en arena.  Eksempelprotokollen måler virkningen af ethanoleksponering på orme bevægelse.

Protocol

Følgende protokol er et uddrag fra Davies et al,An Assay for Måling af virkningerne af ethanol på Locomotion Speed af Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2015). Trin til at udføre på dagen før Assay L4-stadieorme vælges til friske nematodevækstplader (NGM), der er seedet med en græsplæne på OP50 E. coli</…

Materials

C. elegans strains	Caenorhabditis Genetics Center
60 x 15 mm Petri plates, triple vented	Greiner Bio-One	628161	Other plate brands will suffice.
NGM agar	Various		NaCl (3 g/L), agar (17 g/L), peptone (2.5 g/L), 1 ml cholesterol (5 mg/ml in ethanol), 1 ml (1 M) MgSO4, 1 ml (1 M) CaCl2, 25 ml (1 M) KPO4, pH=6, 975 ml H2O
Forceps	Various		e.g., Fisher Scientific #10300
37 °C Incubator	Various		For drying agar
Copper rings	Plumbmaster	STK#35583 (48 cap thread gasket)	1.6 cm inner diameter, 1.8 cm outer diameter copper rings
100% ethanol	Various
Parafilm M	Bemis	PM996
CCD camera	QImaging	RET-4000R-F-M-12	This camera has a large field of view.
Stereomicroscope with C-mount and 0.5X objective	Leica	MZ6	Discontinued model, M60 is current equivalent.
Light source	Schott	A08923	3”x3”  backlight for even illumination across the field of view
Imaging and tracking software	Media Cybernetics	ImagePro-Plus v6.0-6.3	Newer versions of the software have tracking functions.