Zebrafisk kardiomyopati modell: Droginducerad kardiotoxicitet

Overview

Denna video beskriver tekniken för att skapa en zebrafisk kardiomyopati modell med minimala variationer bland experimentella grupper och i provet skapar vi zebrafisk kardiomyopati modell med hjälp av drogen doxorubicin.

Protocol

1. DOX injektion i vuxen fisk

1. Placera en ren 100 mm petriskål med en svamp inuti den, under ett dissektionsmikroskop, och justera sedan fokus. Skär svampen för att göra en hålighet på ca 4 cm lång för att hålla en fisk. Gör en längre hålighet för en större fisk.
2. Förbered en 34 G nål med en 10 μL mikrospruta. Skölj nålen med 1x HBSS-buffert för att ta bort eventuella bubblor och block från sprutan och slangen.
3. Söv den vuxna fisken i embryovatten som innehåller 0,16 mg/mL trikain i 2 min.
   OBS:Långvarig bedövning över 5 min följt av DOX-injektion kan lätt orsaka fiskdöd.
4. Blötlägg svampen i embryovatten med trikain och överför fisken till svampen för injektion.
5. Utför IP DOX injektion med någon av de två metoder som beskrivs nedan.
   1. Klassisk IP-injektion
      1. Placera fisken med buken upp i svampens hålighet. Sätt snabbt in nålen, med en 45° vinkel mot fiskkroppen i mittlinjen mellan bäckenfenorna, och penetrera cirka 1-2 mm. Släpp all DOX-lösning långsamt. Vänta 5 s innan du drar ut nålen. Kontrollera DOX-leveransen med en synlig röd färg i fiskmagen.
   2. Alternativ IP-injektion
      1. Placera fisken i senareled på svampen med främre till höger. Stabilisera försiktigt fisken med en trubbig ände med vänster hand och håll mikrosprutan med höger hand.
      2. Placera nålen under sidolinjen ovanför bäckenfenan, med avfasningen uppåt. Peka på 7 klockans läge i 45° vinkel, sätt in nålen 3-4 mm till fiskhålan som ligger mellan bäckenhålorna och analfenorna och tryck sedan långsamt in kolven. Kontrollera DOX-leveransen med en synlig röd färg i fiskmagen.
6. Överför snabbt den injicerade fisken till en ren korsning tank fylld med färskt systemvatten så att fisken kan återhämta sig. Skölj nålen en gång med 1x HBSS-buffert mellan injektionerna.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Crossing tank	Aquaneering	ZHCT100	Fish breeding
Doxorubicin hydrochloride	Sigma	D1515-10MG
Hank's balanced salt solution (HBBS)	ThermoFisher	14025076	Vehicle for DOX
100 mm petri dish	Falcon	431741
10 μL NanoFil micro-syringe	WPI	NANOFIL	For injection
34 gauge needle	WPI	NF34BV-2	For injection
Tricaine	Argent		Anesthetizing fish