التفكك الميكانيكي: طريقة للحصول على خلايا قابلة للحياة من الأنسجة

Abstract

المصدر: Garaud et al. ، بروتوكول بسيط وسريع لفصل الأنسجة البشرية الطازجة غير الأنزيمية لتحليل الخلايا الليمفاوية المتسللة. J. Vis. Exp. (2014).

يصف هذا الفيديو التفكك غير الأنزيمي للأنسجة البشرية الطازجة للحصول على خلايا قابلة للحياة. تستخدم هذه التقنية للتحليل النوعي والكمي للخلايا الإيجابية CD45 (الخلايا الليمفاوية / الكريات البيض) الموجودة في مختلف الأنسجة البشرية الطبيعية والخبيثة.

Protocol

< ص الفئة = "jove_title" >1. تحضير الأنسجة المتجانسة

تشريح
1. الأنسجة المقطوعة (الأنسجة الخبيثة والطبيعية المستقطعة من غرفة العمليات) موجودة في مختبر علم الأمراض من قبل موظفين مدربين للالتقاط الفوري. تتم معالجة الورم و NANT (الأبعد مسافة من الورم قدر الإمكان) وشظايا الأنسجة الطبيعية بشكل روتيني في غضون 1-3 ساعات من الاستئصال الجراحي في مختبر BSL2 باستخدام إجراءات السلامة البيولوجية القياسية للأنسجة البشرية. يتم توضيح مخطط انسيابي للبروتوكول في الشكل 1.
2. قم بوزن جميع شظايا الأنسجة (طبيعي ، NANT والورم) وقم بقياس الطول والعرض والارتفاع (الطول × العرض × الارتفاع). هذه خطوة مهمة للتطبيع اللاحق للمجموعات السكانية الفرعية للخلايا ، والحمض النووي الريبي المستخرج....

Results

الشكل 1: مخطط تدفق البروتوكول.يتم عرض إجراءاتنا لمعالجة الأنسجة البشرية الطازجة وبعض الأساليب التحليلية التي يمكن استخدامها لاحقا لتقييم الخلايا الليمفاوية التي تتسلل إلى الأنسجة البشرية.

الشكل 2: صورة ملطخة ب H & E لبصمة أنسجة ورم الثدي.تظهر هذه البصمة ، المأخوذة من جزء جديد من أنسجة ورم ال.......

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments GentleMacs Dissociator ميلتيني بيوتيك 130-093-235 BD Medimachine مكافئ إلى حد ما جهاز طرد مركزي 5810 R إيبندورف أو أجهزة الطرد المركزي القياسية الأخرى جهاز طرد مركزي 5417 R إيبندورف أو غيرها من أجهزة الطرد المركزي الدقيقة القياسية خزانة السلامة الحيوية من الفئة الثانية A2 من Esco إسكو جلوبال أو غطاء محرك BSL2 قياسي آخر مجهر مقلوب نيكون كسوف TS100 أو مجهر آخر متوافق مع مقياس الدم غرفة بوركر مارينفيلد 640210 أو مقياس الدم القياسي الآخر مقياس التدفق الخلوي Navios بيكمان كولتر أو مقياس التدفق الخلوي الآخر (يوصى ب 8-10 ألوان) GentleMacs C-Tube ميلتيني بيوتيك 130-096-344 يستخدم BD Medimachine Filcon طبق ثقافة الخلية سارستيدت 72,710 أو غيرها من الأواني البلاستيكية غير النارية مشرط يمكن التخلص منه سوان مورتون 510 ريال أو مشرط معقم قياسي للاستخدام الفردي مصفاة خلية BD 40 ميكرومتر بيكتون ديكنسون 734-0002 أو غيرها من الأواني البلاستيكية غير النارية بي دي فالكون أنبوبي 50 مل بيكتون ديكنسون 352070 أو غيرها من الأواني البلاستيكية غير النارية بي دي فالكون أنبوب 15 مل بيكتون ديكنسون 352097 أو غيرها من الأواني البلاستيكية غير النارية BD FACS أنبوب 5 مل بيكتون ديكنسون 352008 أو غيرها من الأواني البلاستيكية غير النارية ماصة باستور معقمة 5 مل VWR 612-1685 أو غيرها من الأواني البلاستيكية غير النارية أنبوب ميكروفيوج 1.5 مل إيبندورف 7805-00 أو غيرها من الأواني البلاستيكية غير النارية اكس فيفو 20 لونزا BE04-448Q يوصى باستخدام وسيط خال من المصل محلول ملحي مخزن بالفوسفات لونزا BE17-516F PBS الفسيولوجية القياسية تريبان بلو VWR 17942ه أو وصمة عار حيوية أخرى