Summary

어두운 적응 슬라이스 준비에 마우스 망막 뉴런에서 패치 클램프 레코딩

Published: September 12, 2010
doi:

Summary

여기 electrophysiological 레코딩을위한 마우스 망막의 어두운 적응 조각을 생성하는 절차를 설명합니다.

Abstract

우리의 시각적 경험은 우리의 망막 photoreceptors의 시각 색소가 빛 에너지의 광자를 흡수하여 세포막의 순환 – 염기 – 문이 채널의 폐쇄로 이어질 세포 사건의 폭포를 시작하면 시작됩니다. 멤브레인 전위의 결과로 변경 막대와 원뿔 시냅스 터미널 모두에서 신경 전달 물질 방출의 양을 감소에 차례로 연결됩니다. photoreceptor 막 잠재력에 가벼운 evoked 변화가 망막에 하류 활동으로 연결 방법을 측정하기 위해 과학자들은 수십 년 1,2에 대한 망막 슬라이스 준비에서 electrophysiological 음반을 만들었습니다. 과거에는 이러한 조각은 거름종이에 첨부되어 망막 조직에 면도날로 수동으로 절단되었습니다;과 함께 최근 몇 년 동안 깔끔히의 또 다른 방법은 망막 조직이 낮은 겔화 온도 한천 배지에 포함된 의하여 개발되었으며 냉각 솔루션에 슬라이스 마이크로톰 3,4 진동. 이 준비가 덜 표면 손상이 매우 강력한 빛을 evoked 반응과 함께 망막 조각을 생산하고 있습니다. 여기 우리는이 절차는 시각 색소를 표백되지 않도록 적외선에 따라 할 수있는 방법을 문서.

Protocol

1. 준비 전극 1M NaCl의 모두를 수영하고 둘 사이 15V 운전 ~ 20 S.에 대한 1 Hz에서 사인 파를 사용하여 녹음과 참조 전극을 준비 micropipette 풀러 (서터 인스 트루먼 트의 P – 97을)를 사용하여 기록 전극을 만듭니다. 패치 – pipettes은 1.2 mm의 외부 직경 0.69 mm (셔터 인 스트 루먼트, 고양이 # B120 – 69 – 10)의 내경과 borosilicate 유리를 사용하십시오. 전극의 끝부분을 통해 일련의 저항을 측정합니?…

Discussion

척추 망막에서 슬라이스 녹음 수십 년 1,2에 대해되었습니다, 그리고 망막 회로는 입사 광을 인코딩하는 방법에 깊은 이해를 제공하는 매우 성공적으로되었습니다. 진동 마이크로톰와 절삭 오히려 직접보다 면도날로의 장점은 망막 조각이 표면에 덜 손상을 초래한다는 것입니다. 흡입 피펫으로 그것은 단지 세포 유형의 대부분 5,6을 확인했습니다 망막 회로, 그들의 연결을 유지 ?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 작품은 NIH 그랜트 EY17606 (APS)에 의해 지원되었다.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Micropipette Puller   Sutter Instruments P-97  
Borosilicate glass   Sutter Instruments B120-69-10  
Polyethylene tubing   Intramedic PE205  
Agar   Sigma A7002  
Low gelling temp agarose   Sigma A0701  
Ames’ Medium   Sigma A1420  
Penicillin-Streptomycin   Sigma P0781  

References

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Cite This Article
Arman, A. C., Sampath, A. P. Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation. J. Vis. Exp. (43), e2107, doi:10.3791/2107 (2010).

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