인슈린 과다 - euglycemic 클램프은 인슐린 작용의 평가에 대한 "황금 표준"입니다. 인슐린은 포도당의 이해를 자극 일정한 속도로 주입합니다. 이 드롭에 대응하기 위해 주입 외인성 포도당의 양은 인슐린 감도 나타내는 것입니다. 여기 절차는 의식, 억제 쥐에서 수행됩니다.
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이 논문에서
요약
초록
2 형 당뇨병 (T2D)는 빠르게 유행에 증가합니다. 불충 분한 인슐린 생산 또는 고가 혈당 수준에서 인슐린 생산 T2D 결과를 활용하는 무능력에 의해 특징. 인슐린 민감도를 평가의 "금 표준"은 인슈린 과다 - euglycemic 클램프 또는 인슐린 클램프입니다. 이 절차에서는 인슐린은 혈당의 드롭 결과 일정한 속도로 주입합니다. 일정한 수준의 혈당을 유지하려면, 외인성 포도당 (D50)은 정맥 순환에 주입합니다. 항상성을 유지하기 위해 주입 포도당의 양은 인슐린 감도 나타내는 것입니다. 여기서 우리는 만성 catheterized, 억제, 의식 쥐의 기본 클램프 절차를 보여줍니다. 이 모델은 혈액이 동물에게 최소한의 스트레스와 회수 수 있습니다. 마취의 유도에 따라, 정중선 절개가 만들어이며 왼쪽 일반 경동맥과 경정맥 정맥은 오른쪽 catheterized 있습니다. 삽입된 카테터는 다음 exteriorized 및 보안, heparinized 식염수에 플러시됩니다. 동물은 체중 증가가 매일 모니터링과 사전 실험 4-5일에 대한 복구하는 허용됩니다. 사전 수술 수준에 체중을 회복만이 이러한 동물 실험에 사용됩니다. 실험의 날, 쥐가은 금식하고 인슐린과 D50을 포함하는 펌프에 연결되어 있습니다. 베이스 라인 포도당은 동맥 라인에서 평가 및 실험 (euglycemia)에 걸쳐 벤치 마크를 사용합니다. 이 다음, 인슐린은 정맥 순환에 일정한 속도로 주입합니다. 혈당의 드롭을 일치시키려면, D50이 들어갈 수 있습니다. D50 주입의 속도는 이해의 속도보다 큰 경우, 포도당의 증가가 발생합니다. 마찬가지로, 속도는 온 몸이 포도당 이해에 맞게 부족한 경우, 드롭 발생합니다. 안정적인 혈당 수치를 얻을 때까지 포도당의 적정가 계속됩니다. 이 기간 동안 안정적인 포도당 수준 및 포도당 주입 속도는 기록하고보고됩니다. 결과는 온 몸이 인슐린 민감도의 인덱스를 제공합니다. 이 기술은 특정 실험 요구 사항을 충족시킬 수 정제된 수 있습니다. 그것은 조직을 특정 인슐린 자극 포도당 이해뿐만 아니라 몸 전체의 포도당 회전율을 확인할 수 있습니다 방사성 추적기를 사용하여 좀 더 향상됩니다.
프로토콜
A : 아티와 정맥 순환 외과 Catheterization
1 부 : 아티와 정맥 카테 테르 준비
- 의 15cm를 잘라 PE - 50 (0.58 mm의 내경 (0.023 ") X 0.965 mm (0.038의 외경"). silastic 튜브의 1mm 섹션 (내부 직경은 1.65mm X 0.76mm를 (0.030 ") 컷 비드 금지로 사용하기 위해 (0.065 ") 외경). 금지 구슬은 장소에 한번 카테터를 당기는 쥐를 방지할 수 있습니다.
- 금지 비드의 루멘에 마이크로 해부 포셉의 도움말을 넣고 부드럽게 자리가 넓은 스트레칭 분리 포셉의 끝을 잡고. 마이크로 해부 포셉의 다른 쌍을 사용하여 억제 비드의 루멘에 silastic 튜빙을 슬라이드. 강력한 접착제 접착제 (Loctite 슈퍼 접착제)로 고정합니다. 구슬은 카테터 주위에 평평하게 누워 있어야합니다. 카테터가 건조하도록 허용 (24).
- 300g 랫은 동맥 라인 경정맥 라인 ~ 3.2cm되는 동안 억제 비드에서 ~ 2.7cm이다. 금지의 카테 테르의 길이는 체중의 모든 100g 증가 0.5cm로 조정됩니다. 베벨이 수의 주사 삽입 동안 그릇으로 카테터의 가장자리를하지 마십시오.
- 수술 즉시 이전, heparinized 호수....
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토론
처음에는 인간의 인슐린 민감도의 조사 개발, 클램프 절차는 현재 실험실 쥐 및 쥐 등 다른 수종에 적응되었습니다. 인슐린 저항 조사 동물 모델은 인슐린 민감성과 관련 pathologies의 pathophysiology을 이해뿐만 아니라 임상 가치 1,2을 치료 개입을 식별에 큰 도움을 제공합니다. 동물의 인슐린 민감도를 평가하는 여러 가지 방법 3을 고용하고 있습니다. 이러한 기술은 포도당 내성 검사의 유사 (GTTs)과 인슐린 내성 검사 (ITTs) 4-6뿐만 아니라 금식 정상 상태 조건 7-9에서 파생된 인슐린 감도 / 저항의 인덱스를 포함합니다. 그러나, 인슐린 감도는 기본 실험 목적 및 기술적 타당성 때 인슐린 클램프 제한되지 것은 표준 남아 있습니다. 여기서 우리는 의식, 억제 쥐에서 가장 기본적인 클램프 절차를 제시한다. 변수 외인성 포도당이 glycemia을 유지하기 위해 주입하는 동안 인슐린은 일정한 속도로 관리합니다. 동물의 순환에 .......
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공개 사항
절차는 캘거리 애니멀 케어 대학 승인 및위원회를 사용하여 실험을위한 실험실 동물 과학 지침 캐나다 협회가 준수했다. 저자는 충돌 관심이나 공개가 없습니다.
감사의 글
이 연구는 건강 연구와 게놈 Canada.JS의 캐나다 연구소에 의해 지원 되었음 앨버타 유산 Foundationfor 의료 연구, 심장 및 Canadaand의 행정 재단 캐나다 당뇨병 협회에서 급여 지원 수상 경력을 보유하고 있습니다. 데이빗 Wasserman과 시어러 실험실이 절차를 가르치는 빙글의 브레이에 특별 감사드립니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약의 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 (옵션) |
| Intramedic 폴리에틸렌 튜브 (PE - 50) | 피셔 사이 언티픽 | 14-170 - 12B | 0.58 mm (0.023 ") 0.965 mm의 X 외경 (0.038")의 내경 |
| 다우 코닝 Silastic의 실험실 튜브 | 피셔 사이 언티픽 | 11-189 - 15C | 0.76 mm의 내경 (0.030 ") 1.65mm의 X 외경 (0.065") |
| Tygon S - 50 - HL 의료 튜브 | 하버드 장치 | PY2 72-1251 | 3.2mm의 내부 직경 (0.125 ") 4.7mm의 X 외경 (0.1875") |
| Loctite 슈퍼 접착제 | 그랑 & 토이 | 32,237 | 젤 제어 |
| 무균 외과 블레이드 | VWR | BD371610 | |
| 곡선 마이크로 분석 해 봅시다 집게 | 조지 티만 & (주) | 160-20 | X 2 |
| 스트레이트 마이크로 분석 해 봅시다 집게 | 조지 티만 & (주) | 160-15 | X 2 |
| 곡선 Hemostat | 조지 티만 & (주) | 105-1135 | X 2 |
| 스트레이트 Hemostat | 조지 티만 & (주) | 105-1130 | X 2 |
| Hemostat 팁 경비 | 로빈스 인 스트 루먼트 주식 회사 | 15.09-2-004 | |
| 스트레이트 외과 가위 | 조지 티만 & (주) | 105-402 | |
| VENOJECT 멀티 샘플 Luer 어댑터 | Terumo 의약품 | 810127A | 21 게이지, 1 인치 |
| 멸균 카테터의 Introducer | 백톤 디킨슨 | 406999 | |
| 14 게이지 블런트 니들 | 백톤 디킨슨 | 511310 | 14 게이지, 2 인치 |
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| 커튼 면봉 | VWR | 10806-005 | |
| 4ply 고즈 패드 | VWR | CA43845 - 062 | |
| 스몰 애니멀 무선 클리퍼스 | 하버드 장치 | 729063 | |
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| 스테인레스 스틸 튜브의 Couplers | 하버드 장치 | 72-4434 | 23 게이지, 0.3 인치 |
| 스테인레스 스틸 튜브가 플러그 | 하버드 장치 | 72-4436 | 23 게이지, 0.5 인치 |
| 스테인레스 스틸 블런트 니들스 | Instech 연구소 주식 회사 | LS22 | 22 게이지 |
| 60 학위 Y - 커넥터 | 소형 부품 | STCY - 22-05 | 22 게이지 |
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| 마이크로 원심 분리기 튜브 | VWR | 53550-778 | |
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| 3ml 플라스틱 Luerlok 팁 주사기 | 백톤 디킨슨 | 309585 | |
| 헤파린 항응고제 주입 | 서양 의약품 유통 센터 (주) | 102824 | 제조 업체 : LEO 제약 주식 회사 콩크. 1,000 IU |
| EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) 솔루션 | Promega 주식 회사 | V4231 | 0.5 M, pH를 8.0 |
| 식염 | 서양 의약품 유통 센터 (주) | ABB7983154 | 제조 업체 : Hospira 0.9 %의 나트륨 염화물 |
| 50 % 덱스 트로 오스 | Vetoquinol | 8DEX012D | |
| Humulin - R | 엘리 릴리 | HI - 210 | 100U/ml |
| 1ml 인슐린 주사기 | 백톤 디킨슨 | 309311 | |
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| Fisherbrand * Microhematocrit 모세관 튜브 | 피셔 사이 언티픽 | 22-362-574 | |
| 원터치 울트라 테스트 스트립 | LifeScan 주식 회사 | AW 085 - 314H | |
| 원터치 울트라 혈당 측정기 | LifeScan 주식 회사 | AW - 314B 085 | |
| Pentobarbitol 나트륨 | Ceva 쌍떼 Animale | 1715 138 | 콩크. 54.7mg/ml |
| 레드 연구실 라벨 테이프 | VWR | 89097-932 | |
| 블루 연구소 라벨 테이프 | VWR | 89097-936 | |
| 크기를 달다 | 피셔 사이 언티픽 | 01-913-88 | |
| 와동 | VWR | 58815-234 | |
| 타이머 | VWR | 62344-641 |
참고문헌
- Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. Limitations to basal and insulin-stimulated skeletal muscle glucose uptake in the high-fat-fed rat. Am J Physiol Endocrinol Metab. 279, E1064-E1071 (2000).
- Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H.
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