Summary
Protocol
- Klipp svansen bitar (3 mm) och öron märke.
- Lägg till 720 M L STE och 30 m l proteinas K (10 mg / ml lager).
- Inkubera vid 55 ° C på värmeblock och vortexa varje timme i 3 timmar i full fart i 10 sekunder.
- Inaktivera proteinas K vid 70 ° C i 5 minuter.
- Släcka på is i 5 minuter.
- Centrifugera svans DNA i 10 minuter vid full hastighet.
- Häll i nya rör som innehåller 720 m l isopropanol.
- Fällning DNA genom att vända röret eller vortexa.
- Spinn ner DNA i 5 minuter vid full hastighet. Avlägsna supernatanten.
- Tvätta pellets med 70% etanol.
- Spinn ner genomisk DNA 5 minuter vid full hastighet. Avlägsna supernatanten.
- Låt DNA torka i 1-2 minuter.
- Resuspendera DNA i 100-200 m l beroende på storlek på pellets.
- Placera röret vid 55 ° C i 1 timme för att underlätta upplösningen av DNA.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
STE | Buffer | 100 mm Tris; pH 8.5 /5 mM EDTA /0.2% SDS /200 mM NaCl / in H2O | ||
TE | Buffer | 100 mM Tris; pH 5.0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl |