Summary
अवर रग Cava घनास्त्रता के माउस पूरा ठहराव मॉडल नस दीवार के ऊतकों और thrombus के quantifiable मात्रा में पैदावार. यह नस दीवार और occlusive thrombus के बीच और बातचीत करने के लिए तीव्र जीर्ण सूजन से प्रगति का आकलन करने में मूल्यांकन के लिए उपयोगी साबित हो गया है.
Abstract
शिरापरक thromboembolism (VTE) दोनों गहरी शिरा (DVT) घनास्त्रता और फुफ्फुसीय अन्त: शल्यता (पीई) भी शामिल है. संयुक्त राज्य अमेरिका (यूएस), उच्च रुग्णता और मृत्यु दर में दरों में एक गंभीर स्वास्थ्य चिंता का विषय 1-2 VTE बनाते हैं. हृदय रोग और स्ट्रोक के बाद, VTE के तीसरे सबसे आम संवहनी रोग 3 है. अकेले अमेरिका में, वहाँ एक अनुमान 900.000 प्रत्येक वर्ष प्रभावित लोगों 300.000 मौतों सालाना 3 घटनेवाला के साथ, है. Vivo पशु मॉडल में इस रोग के तंत्र का अध्ययन करने के लिए एक विश्वसनीय आवश्यक है.
अवर रग Cava घनास्त्रता के माउस पूरा ठहराव मॉडल का उपयोग करने के कई फायदे हैं. माउस मॉडल सीमित उपलब्धता परीक्षण एजेंटों की बहुत छोटी मात्रा के प्रशासन के लिए अनुमति देता है, लागत नाटकीय रूप से कम करने. सबसे होनहार जीन knockouts कि विशिष्ट भड़काऊ और जमावट कारक कार्यों चित्रित किया जा करने की अनुमति के साथ चूहों के लिए संभावित है. वर्तमान आणविक assays नस दीवार, thrombus, पूरे रक्त, और assays के लिए प्लाज्मा के quantitation के लिए अनुमति देते हैं. हालांकि, एक प्रमुख चिंता इस मॉडल को शामिल ऑपरेटिव आकार की कमी और जहाजों की मुलायमता है. इसके अलावा, छोटे IVC नमूना वजन (0.005 ग्राम मतलब) की वजह से यह जानवरों की संख्या सटीक सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए ऊतक के लिए thrombus, और वास्तविक समय पोलीमरेज़ चेन प्रतिक्रिया (RT-पीसीआर), पश्चिमी धब्बा के रूप में रक्त assays में वृद्धि करने के लिए आवश्यक है, एंजाइम से जुड़ी immunosorbent (एलिसा), zymography, नस दीवार और thrombus सेलुलर विश्लेषण, और पूरे रक्त और प्लाज्मा assays 4-8.
ठहराव मॉडल के साथ बड़ा नुकसान यह है कि रक्त के प्रवाह की कमी thrombus और नस दीवार पर प्रशासित प्रणालीगत चिकित्सात्मक एजेंटों की अधिक से अधिक प्रभाव को रोकता है.
Protocol
1. माउस संज्ञाहरण प्रक्रियाएं
- पशु अपने पिंजरे से हटा रहे हैं और एक चतनाशून्य करनेवाली औषधि गैस शामिल होने के लिए पूर्व ऑपरेटिव isoflurane 5% और 100% ऑक्सीजन में शामिल चैम्बर में रखा प्रति मिनट 0.5 लीटर (vaporizer नियंत्रित) के एक प्रवाह दर पर.
- चूहे संवेदनाहारी प्रेरण कक्ष में बेहोश कर रहे हैं, चैम्बर से हटा दिया और उदर पेट बिजली कतरनी के साथ मुंडा है, या कक्ष के भीतर बनाए रखा अगर एक बाल लोमनाशक (1min) प्रयोग किया जाता है.
- जबकि अभी भी बेहोश करने की क्रिया के तहत, वे तौल रहे हैं, आंखों बाँझ नेत्र मरहम के साथ lubricated हैं और फिर एक सामान्य संज्ञाहरण के तहत गर्म हीटिंग डिवाइस परिसंचारी पानी पर एक पृष्ठीय recumbancy में रखा, एक नाक शंकु के साथ, isoflurane और ऑक्सीजन का उपयोग. इस बिंदु पर ऑक्सीजन की दर प्रति मिनट 0.2 लीटर कम है.
- पेट chlorhexidine समाधान के साथ छिड़काव किया जाता है (chlorhexidine diacetate तेजी bacterialcidal और लगातार) और बाँझ धुंध के साथ तीन बार नष्ट या जब तक शल्य साइट साफ है.
2. माइक्रो सर्जिकल माउस और वसूली प्रक्रिया
- त्वचा और पेट की दीवार पेट उजागर के माध्यम से एक उदर midline चीरा (2cm) परितारिका कैंची के साथ किया जाता है. एक बाँझ खारा लथपथ 2x2in धुंध जानवर की बाईं ओर करने के लिए आंतों को प्रतिबिंबित करने के लिए प्रयोग किया जाता है. एक माउस restrainer जगह अवर रग Cava (IVC) की अनुमति दृश्य में डाल दिया है.
- इस बिंदु पर, में 2% isoflurance और 100% 0.2 लीटर / मिनट की दर ऑक्सीजन के रखरखाव स्तर शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया के शेष के लिए प्रयोग किया जाता है.
- ब्लंट विच्छेदन एक बाँझ applicator झाड़ू और अतिरिक्त नाजुक परितारिका आधा घुमावदार ऊतक संदंश का उपयोग करने के लिए मदद की है. केयर माउस ऊतकों से निपटने के लिए वे बेहद नाजुक रहे हैं में लिया जाना चाहिए. उदर गुहा में प्रवेश करने पर, एक बाँझ खारा लथपथ 4x4in धुंध का उपयोग करने के लिए प्रतिबिंबित और एक बाँझ टांगना पर आंतों अमल में लाना है, इस प्रकार IVC के दृश्य की अनुमति.
- सभी IVC वापस गुर्दे नसों से श्रोणिफलक विभाजन शाखाओं, जबकि पक्ष शाखाओं 7-0 गैर प्रतिक्रियाशील prolene sutures के साथ ligated हैं cauterized हैं.
- IVC महाधमनी से अलग है, सिर्फ गुर्दे की नसों को नीचा. 7-0 prolene IVC ligate के लिए प्रयोग किया जाता है.
- laparotomy साइट एक फैशन दो परत में बंद कर दिया है. हमारी प्रयोगशाला का उपयोग करता है एक सतत पैटर्न में 5-0 vicryl, एक सिंथेटिक सीवन, पेट की दीवार को बंद. चिपकने वाला त्वचा गोंद करने के लिए त्वचा को बंद करने के लिए प्रयोग किया जाता है. हटाने के लिए कोई बाहरी sutures हैं.
- चूहे तो एक व्यक्ति माउस पिंजरे में बरामद कर रहे हैं, के बाद operatively (2 घंटे के लिए 45 मिनट) के एक हीटिंग दीपक (पिंजरे से न्यूनतम दूरी 24 इंच) के तहत मनाया, तो उनके मूल आवासीय इकाइयों के लिए लौट आए. दर्द दवा और विरोधी भड़काऊ एजेंट अगर यह अध्ययन का उद्देश्य के साथ हस्तक्षेप नहीं करता है है के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. वैज्ञानिक औचित्य दर्द दवा रोक, पशु चिकित्सा, और ICUCA अनुमोदन की जरूरत है. हमारी प्रयोगशाला में पाया गया है कि buprenorphine, 0.05-0.1 मिलीग्राम / किग्रा वर्ग चूहों के लिए एक उत्कृष्ट पूर्व और पोस्ट ऑपरेटिव एनाल्जेसिक है. इसके अलावा, lidocaine 4mg/kg (0.4 मिलीग्राम / एक 1% समाधान के kg) में चीरा साइट में संचार हो सकता है जब प्रणालीगत दर्दनाशक दवाओं प्रयोगात्मक परिणाम उलझाना सकता है.
- प्रत्येक प्रायोगिक समूह से शाम जानवरों IVC या किसी draining शाखाएं हैं ligated cauterized या नहीं को छोड़कर ऊपर शल्य दृष्टिकोण के लिए इस्तेमाल किया विच्छेदन, गुजरना.
- इच्छामृत्यु अमेरिकी पशु चिकित्सा कृन्तकों के लिए इच्छामृत्यु पर मेडिकल एसोसिएशन दिशानिर्देश द्वारा उल्लिखित सिफारिशों के अनुसार में किया जाता है.
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Discussion
अवर रग Cava घनास्त्रता के माउस पूरा ठहराव मॉडल अलग उम्र के चूहों के कई उपभेदों पर प्रदर्शन किया जा सकता है है. मॉडल कम से कम 20 ग्राम के वजन में चूहों के लिए सबसे अनुकूल है. शिरापरक घनास्त्रता के इस पशु मॉडल जांचकर्ताओं नस दीवार और occlusive शिरापरक thrombus के बीच भड़काऊ संबंधों का अध्ययन करने के लिए अनुमति देता है. हमारे अनुभव से, हमने पाया है कि समूह 10 प्रतिशत या अधिक पशुओं thrombus वजन, नस दीवार भड़काऊ कोशिकाओं की गिनती, नस दीवार प्रोटीन, नस दीवार जीन अभिव्यक्ति, और गतिविधि के लिए पूरे रक्त प्लाज्मा या विश्लेषण के लिए समूहों के बीच सांख्यिकीय महत्व प्राप्त करने के लिए की जरूरत है assays.
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Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflurane gas | |||
| Prolene 7-0 suture | |||
| Vicryl 5-0 suture | |||
| Skin glue | |||
| Eye lube | |||
| Nolvasan Solution or bacteriostatic solution | |||
| Stereomicroscope scope | |||
| MediCapture | |||
| Cotton Applicators | |||
| 2x2 Gauze | |||
| Heating pad | |||
| Anesthetic machine | |||
| Glass bead instrument sterilizer | |||
| Micro surgical instruments | |||
| Abdominal Restrainers |
References
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