العصبية زرع السلائف هي استراتيجية واعدة لحماية و / أو استبدال / عنق الرحم المختلة وظيفيا فقدت الخلايا العصبية الحركية في الحجابي إصابة الحبل الشوكي (النخاع الشوكي) ، واضطراب في الخلايا العصبية الحركية ، التصلب الضموري الخطوط الفرعية (ALS). ونحن نقدم على بروتوكول لتسليم خلية لعنق الرحم القرن بطني الحبل الشوكي في القوارض نماذج من المرض واصابات النخاع الشوكي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
داخل النخاع زرع الخلايا لاستهداف القرن بطني عنق الرحم في التصلب الجانبي وصدمة إصابة النخاع الشوكي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
حل وسط في التنفس بسبب فقدان الخلايا العصبية الحركية الحجابي هو نتيجة المنهكة لنسبة كبيرة من البشر صدمة إصابة الحبل الشوكي (SCI) (1) والحالات هو السبب الأساسي للوفاة في المرضى الذين يعانون من اضطراب الخلايا العصبية الحركية ، التصلب الضموري الخطوط الفرعية (ALS) 2.
ALS هو اضطراب عصبي المدمرة التي تتميز تنكس السريع نسبيا من الخلايا العصبية العليا والسفلى المحركات. المرضى الخضوع في النهاية إلى المرض في المتوسط 2-5 سنوات بعد تشخيص بسبب شلل الجهاز التنفسي بسبب فقدان الخلايا العصبية innnervation الحجابي المحرك للحجاب 3. الغالبية العظمى من الحالات المتفرقة ، في حين أن 10 ٪ منهم من النموذج العائلي. ويرتبط ما يقرب من عشرين في المئة من الحالات العائلية إلى حدوث طفرات نقطة مختلفة في الجينات النحاس / الزنك الفائق ديسموتاز 1 (SOD1) على الصبغي 21 4. وقد ولدت الفئران المعدلة وراثيا والفئران 6 4،5 تحمل جينات طافرة SOD1 الإنسان (G93A ، G37R ، G86R ، G85R) ، وبالرغم من وجود نماذج حيوانية أخرى من فقدان الخلايا العصبية الحركية ، في الوقت الحاضر أكثر النماذج المستخدمة للغاية من هذا المرض .
اصابات الحبل الشوكي (SCI) هي مجموعة غير متجانسة من الظروف الناتجة عن الإصابات البدنية إلى الحبل الشوكي ، مع نتائج وظيفية مختلفة وفقا لنوعها وموقعها وشدة إصابة 7. ومع ذلك ، ما يقرب من نصف حالات اصابات النخاع الشوكي الإنسان تؤثر على مناطق عنق الرحم ، مما أدى إلى ضعف الجهاز التنفسي المنهكة بسبب فقدان الخلايا العصبية الحركية الحجابي وإصابة الجهاز التنفسي البصلي تنازلي المحاوير 1. وقد تم تطوير عدد من النماذج الحيوانية لاصابات النخاع الشوكي ، والأكثر شيوعا وسريريا ذات الصلة ، كونها كدمة 8.
زرع فئات مختلفة من الخلايا العصبية السلائف (الشخصيات) هي استراتيجية واعدة العلاجية لعلاج إصابات الجهاز العصبي المركزي وتنكس عصبي الصدمة ، بما في ذلك المرض واصابات النخاع الشوكي ، وذلك بسبب القدرة العصبية لتحل محل فقدان أو اختلال الجهاز العصبي المركزي توفير أنواع الخلايا ، وتوفير عوامل الجينات الفائدة 9.
يمكن أن النماذج الحيوانية على حد سواء والمرض اصابات النخاع الشوكي النموذج العديد من الجوانب ذات الصلة سريريا من هذه الأمراض ، بما في ذلك فقدان الخلايا العصبية الحركية الحجابي ويترتب على ذلك من تنازلات التنفسي 10،11. من أجل تقييم فعالية للمجلس الوطنى القائم على استراتيجيات على وظيفة الجهاز التنفسي في هذه النماذج الحيوانية من المرض واصابات النخاع الشوكي ، لا بد من تدخلات الخلوية موجهة خصيصا لأهداف علاجية المناطق التي تحتوي على ذات الصلة ، مثل الخلايا العصبية الحركية الحجابية. ونحن نقدم بروتوكول مفصلة لزرع متعددة داخل النخاع قطعي من الشخصيات في عنق الرحم المسألة بطني الحبل الشوكي الرمادي نماذج الاعصاب مثل الفئران والجرذان G93A SOD1 ، فضلا عن الجرذان الحبل الشوكي المصاب والفئران 11.
البروتوكول
طرق
1. خلية التحضير
كمثال ، سنقوم بشرح الإجراء لإعداد الخلايا الدبقية السلف (12) لزرع بسبب تجربتنا مع هذا النوع من الخلايا. ومع ذلك ، فإن تفاصيل البروتوكول ، بما في ذلك استخدام والمتوسطة والتربسين على سبيل المثال ، تعتمد على نوع من الخلايا خاصة تستخدم لزرع الأعضاء.
- قبل كل الحلول الدافئة إلى 37.0 درجة مئوية في حمام مائي.
- شطف 2X مع HBSS القارورة. إ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
لدراسات شملت SOD1 الفئران والجرذان G93A والعمر والجنس المباراة الحيوانات ضمن مجموعة ، وتوزيع الحيوانات داخل القمامة نفسه إلى مجموعات مختلفة. فمن الأفضل استخدام جميع الحيوانات من جنس واحد لكل من المرض ونماذج اصابات النخاع الشوكي بسبب العمليات المرض قد تختلف بين الذكور والإناث ، إلا أنه قد يكون من المفيد أيضا الحصول على ما يكفي من الحيوانات من كلا الجنسين ممكن للكشف عن آثار محددة الجنس ، كما وقد تم الإبلاغ عن هذه الظاهرة مع الفئران G93A SOD1 13 و
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
وأود أن أشكر : جميع أعضاء لوبور ، Maragakis Rothstein ومختبرات للمناقشة مفيدة ، وقدامى المحاربين مشلولة الأمريكية وكريج نيلسون H. مؤسسة للتمويل.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| اسم كاشف | شركة | فهرس العدد | |
| HBSS | Gibco | 14170 | |
| 0.05 ٪ التربسين | Gibco | 25300 | |
| فول الصويا التربسين المانع (اختياري) | سيغما | T - 6522 | |
| آسيبرومازين ماليات (0.7 ملغ / كلغ) | Fermenta صحة الحيوان | ||
| الكيتامين (95 ملغ / كلغ) | حصن الصحة الحيوانية دودج | ||
| زيلازين (10 ملغ / كلغ) | باير | ||
| # 11 الريشة شفرة جراحية | الإلكترون المجهر العلوم | 72044-11 | |
| القطن يميل تطبيقها (6 بوصة) | الصياد | 23-400-101 | |
| الجرذان ملقط مسنن | أدوات العلوم غرامة | الجرذان : 11023-15 ؛ الماوس : 11042-08 | |
| مقص الربيع متوسطة الحجم | أدوات العلوم غرامة | 15012-12 | |
| مقص صغير الربيع | أدوات العلوم غرامة | 15000-10 | |
| مقراض | أدوات العلوم غرامة | الجرذان : 16121-14 ؛ الماوس : 16221-14 | |
| Microknife | أدوات العلوم غرامة | 10056-12 | |
| أصحاب الإبرة | أدوات العلوم غرامة | 12502-14 | |
| خياطة : 4-0 | Vicryl | S - 183 | |
| الدبابيس : 9 ملم | Autoclip | 427631 | |
| دباسة : 9 مم (# 203-1000 ريفلكس) | العالم آلات دقيقة | 5000344 | |
| ضخ المياه الدافئة (T / مضخة) | Gaymar | P / N 07999-000 | |
| السيكلوسبورين A : 250.0 مل mg/5.0 أمبولات | نوفارتيس / Sandimmune | NDC 0078-0109-01 | |
| FK - 506 | LC مختبرات | F - 4900 | |
| Rapamycin | LC مختبرات | R - 5000 | |
| محقن | العالم آلات دقيقة | UMP2 | |
| 4 الصغرى المراقب مضخة Microsyringe | العالم آلات دقيقة | UMC4 | |
| Micromanipulator | العالم آلات دقيقة | طائرة ورقية - R | |
| 10.0 حقنة هاميلتون ميكرولتر | هاميلتون | 80030 | |
| الإبر هاملتون : 33 عيار ، 45 شطبة ° ، 1 بوصة | هاميلتون | 7803-05 | |
| 20.0 الزجاج الماصات microcapillary ميكرولتر (اختياري) | كيمبل | 71900-20 |
المراجع
- Lane, M. A., Fuller, D. D., White, T. E. Respiratory recovery following high cervical hemisection. Trends in neurosciences. 31, 538-538 (2008).
- Kaplan, L. M., Hollander, D. Respiratory dysfunction in amyotrophic lateral sclerosis. Clin. Chest. Med. 15, 675-675....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
