이 프로토콜은 폴리에틸렌 글리콜 석출에 의해 난황에서 총 IgY의 특정 추출에 대해 설명하고 IgY 기술에 대한 일반적인 정보를 제공합니다.
암탉은 메신저 예방 접종 (Musculus pectoralis, 왼쪽 및 오른쪽, 사출 볼륨 0.5-1.0 ML)를 통해 또는 유전자 건 플라스미드 – 예방 접종에 의해 예방 접종을하실 수 있습니다. 항원의 immunogenicity에 따라, 높은 항체 – titres은 (최대 1:100,000 – 1:1,000,000) 하나 또는 3 이후 얻을 수 – 4 부스트 예방 접종을. 일반적으로, 암탉은 이후 누워 용량 감소에 대한 72주 끊임없이 알을 낳는. 이 프로토콜은 침전 절차 수단 (PEG. 폴손 외. 1980)로 달걀 노른자에서 총 IgY의 추출을 설명합니다. 방법은 두 가지 중요한 단계를 포함한다. 첫번째는 lipids의 제거이고 두 번째 단계 중 하나 뜨는에서 총 IgY의 강수량입니다. 버퍼 (일반적으로 PBS)에 대한 투석 후 IgY – 추출물은 년 이상 -20 ° C에 저장할 수 있습니다. 추출물의 순도는 80 % 근처이고, 계란 당 총 IgY가 누워있는 암탉의 연령에 따라, 40-80 MG에서 다릅니다. 최대 80 MG / 계란 (PEG 침전에 관한)에 40 MG / 계란에서 암탉의 나이가 총 IgY 콘텐츠 증가합니다. 연간 암탉의 누워있는 용량은 325 계란 주위에있다. 60 MG 총 IgY / 계란 (표 1 참조)의 의미 IgY의 콘텐츠를 기반으로 20g 총 IgY / 올해의 총 잠재 수확을 의미합니다.
적당한 IgY 정화 방법의 선택은 정화 (연구소 또는 산업), 비용 효율성, 기술 (실험실 장비)와 환경 (폐기물 관리)에 영향을 미치는 규모에 의해 영향을받습니다. 다양한 IgY 추출 방법은 데 Meulenaer & Huyghebaert (2001, 검토도 쉐이드 외를 참조하십시오. 2005)에 의해 상세하게 검토했다. 일반적으로 이러한 방법의 세 주요 그룹으로 나눌 수 있습니다 :
IgY 준비 순도는 방법의 조합에 의해 증가시킬 수 있으며, 예를 들어, PEG 강수량은 친화도 크로마 토그래피와 함께하실 수 있습니다. 어떤 경우에는 최종 응용 프로그램에 따라 IgY의 물 추출물은 좋은 결과를 (아키타 & 나카이 1993) 달성을 충분합니다. 우리의 경험에 따르면, 우리는 PEG – 석출에 의해 얻을 IgY – 샘플은 다양한 면역 assays 많은 매우 잘했습니다. PEG – 석출 방법을 표준화하여 한 기술 비서가 4 7g 주당 사이에 총 IgY의 금액에 해당하는 약 84 알을 주당을 처리할 수 있습니다. 단순 계산 : 누워있는 암탉은 항원과 예방 접종을합니다. 몇 부스트 예방 접종 후 암탉 30 일 기간 동안 1:50,000의 titre로 특정 항체 (AB)를 생산하고 있습니다. 30 달걀 X 2 ML IgY 추출물 (프로토콜과 그림. 3 참조) 3,000리터와 의미 차례로 3,000리터의 AB – 희석 (통의 용량이 10리터입니다)에 해당하는 60 ML 총 IgY, 해당 AB 솔루션 300 버킷이 채워져 수 있습니다. 그래서, 같은 거대한 AB – 수량의보기에 그것은 지속적인 품질과 특이성의 AB – 수영장 저장 아무런 문제가 없습니다. 이 기술은 별도 polyspecific AB에서 관찰 충전 / 많은 변화를 줄여줍니다.
포유류의 보완 시스템의 아니오 활성화, 하마 (인간의 안티 마우스 항체), 류마티스 요인이나 인간의 피를 그룹 항원 (heteroagglutinins 부족)와 노 교차 반응성 : 수량의 측면의에도 불구하고, IgY AB는 포유류의 IgG에 비해 더 장점이있다.
IgY – AB의 뛰어난 장점은 소위 phylogenetic 거리입니다. Phylogenetic 거리가 동일하게 예방 접종을 때에도, 포유류와 닭의 순이 specificities 사이에 자주 설명한 차이에 대한 이유입니다. 포유 동물과 조류 자신의 면역 시스템 사이의 차이 이외에,이 두 동물 수업 phylogenetic 개발의 차이는 서로 다른 순이 specificities에 기여하고 있습니다. 몇몇 저자는 닭은 종종 더 효율적으로 토끼 (검토 쉐이드 동부 표준시 A. 2005 참조)보다 phylogenetically 고도 보존 포유 동물 단백질이나 펩티드에 대한 애비를 만들어보고있다. 그 결과, 보존 항원은 토끼 면역 체계에 "가면을 쓴"남아 있으므로에서만 약한 또는 "자동"응답을 일으킬 수 있습니다. 병아리와 토끼가 같은 포유류의 항원과 예방 접종을하는 경우뿐만 아니라, 매우 자주 닭이 거의 토끼에서 얻을 수 없습니다 AB – 특이성과 반응한다. AB는 난황에서 추출한 비 invasively 있기 때문에 또한 동물 복지의 측면이 중요합니다. 조합의 유전자 군 (플라스미드) 예방 접종과 IgY 생산은 (Witkowski 외. 2009) 완전히 비침습입니다.
결론적으로, 암탉과 PEG – 석출에 의해 IgY – 추출에서 AB의 생산은 매우 비용 효과적인 최대 1:1,000,000으로 안정 titres와 매우 구체적인 AB 결과. 에이브스와 포유류 사이 phylogenetic 거리로 인해, 닭고기 예 토끼와는 대조적으로 매우 보존 포유류의 항원에 대한 구체적인 AB 생산 수 있습니다. IgY 기술 얻은 AB의 특별한 금액은 치료 / 예방 목적으로 인간 및 동물용 의약품의 IgY – AB를 사용에도 문을 엽니다.
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 교육과 연구의 독일 연방 교육부에서 교부금에 의해 지원되었다 (프로젝트 BiGRUDI [동성 ologische G efahrenlagen : R isikobewertung, U ltraschnelle D etektion 깨물어 I dentifizierung 폰 bioterroristisch relevanten Agenzien, 13N9594]). 우리는 우수 기술 지원 B. Diemar을 (샤히떼 – Universitätsmedizin 베를린, 인스티투트 FÜR Pharmakologie) 감사합니다.